Análisis in silico, clonación, expresión heteróloga y purificación parcial de CYP745C2

"Citocromo P450 (CYP) es el nombre distintivo que recibe una amplia familia de hemoproteínas. La mayoría de estas enzimas tienen actividad de monooxigenasa, que catalizan o transfieren un sólo átomo de oxígeno al substrato. Estas enzimas están involucradas en el metabolismo de muchos xenobiótic...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Gustavo Martínez Barrales
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2020
País:México
Institución:Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica
Repositorio:Repositorio Institucional del IPICYT
OAI Identifier:oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/2439
Acceso en línea:http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/2439
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/Autor/CYP745c2
info:eu-repo/classification/Autor/Hemoproteína
info:eu-repo/classification/Autor/Microalgas
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/24
info:eu-repo/classification/cti/2415
Descripción
Sumario:"Citocromo P450 (CYP) es el nombre distintivo que recibe una amplia familia de hemoproteínas. La mayoría de estas enzimas tienen actividad de monooxigenasa, que catalizan o transfieren un sólo átomo de oxígeno al substrato. Estas enzimas están involucradas en el metabolismo de muchos xenobióticos como medicamentos, pesticidas, agentes cancerígenos y productos químicos contaminantes del medio ambiente. Las CYP de microalgas son un campo sin explorar, considerando que se ha caracterizado bioquímicamente un sólo citocromo P450 de microalgas (Cook et al., 2016; Gong et al., 2018). En el presente trabajo se analizó la secuencia de aminoácidos de CYP745c2 reportada en la base de datos de genomas de microalgas. Este análisis in silico se realizó utilizando las herramientas PFAM, InterPro, MycoCosm, TMHMM, NCBI y MEGA X. La secuencia nucleotídica correspondiente fue optimizada para el uso de codones y expresión heteróloga en Escherichia coli. Los datos obtenidos del análisis in silico sugieren que es una secuencia relacionada a la familia de enzimas citocromo P450. Hasta el momento se ha clonado el gen CYP745c2 y la construcción pET28pps-CYP745c2 se ha verificado por secuenciación; de igual forma se han establecido las condiciones de expresión de la proteína recombinante CYP745c2 usando la cepa BL21 (DE3) Arctic de E. coli y su purificación parcial por cromatografía de afinidad a níquel. Finalmente, un experimento de caracterización espectral de monóxido de carbono sugiere la presencia de un citocromo P450."

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