Clonación, sobre-expresión y purificación de las proteínas NSP5 y NSP6 de rotavirus en Escherichia coli
"Los rotavirus representan una de las principales causas de gastroenteritis entre los niños menores de cinco años a nivel mundial. Son virus icosaédricos no envueltos que pertenecen a la familia Reoviridae. Cada segmento de su genoma de ácido ribonucléico de cadena doble (ARNcd) codifica para u...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2007 |
| País: | México |
| Institución: | Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica |
| Repositorio: | Repositorio Institucional del IPICYT |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/1186 |
| Acceso en línea: | http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/779 http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/1186 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/Cuerpos de inclusión info:eu-repo/classification/Autor/Cristalización info:eu-repo/classification/Autor/Solubilización info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2415 |
| Sumario: | "Los rotavirus representan una de las principales causas de gastroenteritis entre los niños menores de cinco años a nivel mundial. Son virus icosaédricos no envueltos que pertenecen a la familia Reoviridae. Cada segmento de su genoma de ácido ribonucléico de cadena doble (ARNcd) codifica para una proteína estructural (VP) o no estructural (NSP) con excepción del segmento 11 que codifica para dos proteínas (NSP5 y NSP6). NSP5 es una fosfoproteína implicada en la formación de viroplasmas así como en la regulación del equilibrio traducción/replicación de ácido ribonucléico mensajero (ARNm) viral. NSP6 podría tener una función regulatoria sobre NSP5. Sin embargo, no se ha reportado información estructural o funcional de las proteínas NSP5 y NSP6. El principal objetivo del presente trabajo fue la sobreexpresión y purificación de las proteínas NSP5 y NSP6 de rotavirus en Escherichia coli. Se utilizaron distintos sistemas de expresión: 1) fusión a 6XHis en el extremo C-terminal, y 2) fusión a GST en el extremo N-terminal. La fusión con 6XHis produjo 2% de proteína total de NSP5 y 11% de NSP6. En contraste, las proteínas GST-NSP5 y GST-NSP6 corresponden al 34 y 31% de las proteínas totales, respectivamente. Las fusiones con GST parecen tener un efecto de protección contra la toxicidad de la proteínas no estructurales de rotavirus en Escherichia coli. En ambos sistemas, las proteínas recombinantes se encontraron almacendas como cuerpos de inclusión. Se determinaron las condiciones para la solubilización y purificación de las proteínas heterólogas y se obtuvieron cantidades adecuadas para la realización de análisis funcionales y ensayos de cristalización." |
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