Comparación de sistemas de edición genética y edición de bases basados en la tecnología CRISPR/Cas9 y CRISPR/Cas12
[ES] El hecho de que los caracteres agronómicos de interés dependan de variaciones en uno o unos pocos nucleótidos hace especialmente interesante el diseño de sistemas de edición génica para su aplicación en plantas. Es por ello, que en el presente proyecto se persigue la creación de este tipo de si...
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Fecha de publicación: | 2024 |
| País: | España |
| Institución: | Universitat Politècnica de València (UPV) |
| Repositorio: | RiuNet. Repositorio Institucional de la Universitat Politécnica de Valéncia |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:riunet.upv.es:10251/202652 |
| Acceso en línea: | https://riunet.upv.es/handle/10251/202652 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Edición génica Edición de bases CRISPR/Cas9 CRISPR/Cas12 Nicotiana benthamiana Gene editing Base-editing BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Máster Universitario en Biotecnología Molecular y Celular de Plantas-Màster Universitari en Biotecnologia Molecular i Cel·lular de Plantes |
| Sumario: | [ES] El hecho de que los caracteres agronómicos de interés dependan de variaciones en uno o unos pocos nucleótidos hace especialmente interesante el diseño de sistemas de edición génica para su aplicación en plantas. Es por ello, que en el presente proyecto se persigue la creación de este tipo de sistemas de edición de bases que aúnan, en una proteína de fusión, la especificidad, dada por los complejos Cas-RNA guía de los sistemas CRISPR/Cas9 y CRISPR/Cas12, y la capacidad de editar bases, procedente de enzimas capaces de modificar las bases del DNA. Estos sistemas deben ser fáciles de construir y eficaces para el objetivo dado. En este punto es clave la Biología Sintética que permite la creación y diversificación de este tipo de sistemas al crear módulos funcionales ensamblables e intercambiables y sistemas para el ensamblaje sencillo de estos módulos. Sin embargo, la monitorización de los cambios producidos por los sistemas de edición es aún un reto, lo que limita su desarrollo y optimización. En este contexto se plantea el presente Trabajo de Fin de Máster, en el que se generan editores de bases y editores génicos basados en los sistemas bacterianos CRISPR/Cas9 y CRISPR/Cas12 empleando los editores A3A-PBE y ABE8e. Los sistemas de edición de bases creados son evaluados empleando gRNAs que los dirigen la maquinaria de edición a distintos genes. Así se consigue evaluar su eficiencia demostrando la funcionalidad de sistemas de edición A3A-dCas12, ABE8e-nCas9 y ABE-dCas9, tanto con Cas intronizadas como con Cas sin intronizar. Con estos resultados se verifica la posibilidad de crear editores de bases de alta eficiencia en plantas basados en Cas12 y se determinan cuales las versiones de las proteínas Cas más apropiadas para la construcción de estos sistemas. En paralelo, se sientan las bases para la creación de un sistema reportero, basado en la ruta de bioluminiscencia de N. nambi, que permita cuantificar la eficiencia de editado genético en plantas. |
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