Estudio estructura función del activador transcripcional SdrP de Thermus thermophilus
"La transcripción es un proceso altamente regulado que ocurre en todos los organismos vivos. En Thermus thermophilus, una de las proteínas encargadas de regular este proceso es la proteína dependiente de la fase estacionaria (SdrP, por sus siglas en inglés) SdrP es miembro de la familia CRP/FNR...
| Autor: | |
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| Tipo de documento: | dissertação |
| Estado: | Versão publicada |
| Data de publicação: | 2015 |
| País: | México |
| Recursos: | Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica |
| Repositório: | Repositorio Institucional del IPICYT |
| Idioma: | espanhol |
| OAI Identifier: | oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/870 |
| Acesso em linha: | http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/312 http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/741 http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/870 |
| Access Level: | Acceso aberto |
| Palavra-chave: | info:eu-repo/classification/Autor/CAP info:eu-repo/classification/Autor/SdrP info:eu-repo/classification/Autor/Desnaturalización térmica info:eu-repo/classification/Autor/Cristalización info:eu-repo/classification/Autor/Factor de transcripción info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2415 |
| Resumo: | "La transcripción es un proceso altamente regulado que ocurre en todos los organismos vivos. En Thermus thermophilus, una de las proteínas encargadas de regular este proceso es la proteína dependiente de la fase estacionaria (SdrP, por sus siglas en inglés) SdrP es miembro de la familia CRP/FNR, es homólogo estructural de la proteína activada por catabolito (CAP) con un RMSD de 2.7 Á. CAP Y SdrP reconocen secuencias de DNA prácticamente idénticas. Sin embargo, SdrP no rquiere ser activada para reconocer su sitio de unión en el DNA. En el caso de SdrP, se han reportado las secuencias de DNA que reconoce, los genes que activa e incluso se ha resuelto su estructura tridimensional en ausencia de ligandos. No obstante aún no se ha descrito el mecanismo por el cual SdrP reconoce e interacciona con su sitio de unión en el DNA. En este trabajo se purificó a SdrP como proteína recombinate en Escherichia coli. Con la proteína pura, se analizó su capacidad de reconocer una secuencia consenso de DNA de 38 pb, utilizando un ensayo de movilidad seguido por cromatografía de exclusión molecular. Se analizó su estabilidad térmica en presencia y ausencia de trehalosa, monitoreando la fluorescencia intrínseca de la proteína y la fluorescencia de la molécula ácido 8-anilimo-1naftaleno sulfónico (ANS). Se realizaron ensayos de cristalización del complejo SdrP:DNA38, utilizando la técnica de difusión de vapor en gota sentada. Con los cristales obtenidos se realizaron experimentos preliminares de difracción de rayos X. Los resultados de estabilidad térmica muestran que SdrP sigue un proceso de desnaturalización de tres estados. Los ensayos de movilidad seguidos por filtración en gel, demuestran que la proteína SdrP reconoce y se une al fragmento de DNA de 39 pb formando el complejo SdrP:DNA. Con este complejo, se obtuvieron cristales en 11 condiciones diferentes, de los cuales, uno de ellos difrada aproximandamente a 15 Á" |
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