Análisis estructural y funcional de la proteína Clp de Xanthomonas axonopodis pv. citri

"Clp (Crp-like protein) es un regulador de la expresión de factores de virulencia en la bacteria gram negativa Xanthomonas axonopodis pv. citri, fitopatógeno causante del cáncer de los cítricos y de gran importancia económica. Este factor de transcripción pertenece a la familia CRP/FNR presenta...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: AKIRA PEREZ MARQUEZ
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2016
País:México
Institución:Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica
Repositorio:Repositorio Institucional del IPICYT
Idioma:español
OAI Identifier:oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/441
Acceso en línea:http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/38
http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/441
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/Autor/Proteína-ADN
info:eu-repo/classification/Autor/c-di-GMP
info:eu-repo/classification/Autor/Factores de transcripción
info:eu-repo/classification/Autor/CAP
info:eu-repo/classification/Autor/Clp
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/24
info:eu-repo/classification/cti/2415
Descripción
Sumario:"Clp (Crp-like protein) es un regulador de la expresión de factores de virulencia en la bacteria gram negativa Xanthomonas axonopodis pv. citri, fitopatógeno causante del cáncer de los cítricos y de gran importancia económica. Este factor de transcripción pertenece a la familia CRP/FNR presentando 45% de identidad de secuencia con CAP (por sus siglas del inglés Catabolite Activator Protein), sin embargo es único en su clase por dos cuestiones. En primer lugar es capaz de unirse al ADN sin necesidad de unirse a su ligando, y esta unión a ligando solo provoca su inhibición. Además el ligando que une es c-di-GMP, a diferencia de la mayoría de los integrantes de la familia que unen AMPc como es el caso de CAP. Nuestro objetivo es resolver la estructura tridimensional del complejo Clp-ADN. Para esto se expresó Clp en la cepa BL21 (DE3) Star de Echerichia Coli, induciendo la expresión de la proteína con 0.4 mM de IPTG a 28 ⁰C durante 16 horas tras un choque frio de 2 horas. La purificación se realizó mediante tres pasos cromatográficos, IMAC, intercambio iónico y por último exclusión molecular. El proceso tuvo un rendimiento final de 0.6 mg/litro de cultivo. La proteína Clp recombinante obtenida presentó actividad biológica evaluada por un ensayo de movilidad monitoreado mediante exclusión molecular, mostrándose que el tiempo de retención del complejo Clp-ADN disminuye (10 mL = 197242 Da) con respecto al ADN solo (11.8 ml = 65493 Da). Por análisis de Thermofluor se observó que el cloruro de sodio, el glicerol, el cloruro de litio y el ácido glutámico aumentaron la estabilidad térmica de Clp."

Similares en LA Referencia