Expresión de Interferón gamma humano y la Proteína Verde Fluorescente en E. coli usando el sistema de autotransporte ShdA

"La exportación de proteínas recombinantes en Escherichia coli, ya sea ancladas o liberadas fuera de la membrana externa es de gran utilidad en muchas aplicaciones biotecnológicas. En bacterias Gram–negativas se conocen siete vías de secreción de proteínas y una adicional auxiliada por chaperon...

Full description

Bibliographic Details
Author: KARLA IVON SOLIS ANDRADE
Format: master thesis
Status:Published version
Publication Date:2012
Country:México
Institution:Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica
Repository:Repositorio Institucional del IPICYT
Language:Spanish
OAI Identifier:oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/670
Online Access:http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/187
http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/670
Access Level:Open access
Keyword:info:eu-repo/classification/Autor/Secreción de proteinas
info:eu-repo/classification/Autor/Via tipo V
info:eu-repo/classification/Autor/Proteina recombinanates
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/24
info:eu-repo/classification/cti/2415
Description
Summary:"La exportación de proteínas recombinantes en Escherichia coli, ya sea ancladas o liberadas fuera de la membrana externa es de gran utilidad en muchas aplicaciones biotecnológicas. En bacterias Gram–negativas se conocen siete vías de secreción de proteínas y una adicional auxiliada por chaperonas, de ellas la vía V llamada de los ‘Autotransportadores’ es la más simple. Los autotransportadores de Salmollela sp, MisL y ShdA, comparten con AIDA-I, de E. coli, alrededor de un 30% de identidad. El autotransportador AIDA-I ha demostrado ser una herramienta útil para el transporte de proteínas. En el presente trabajo se estudió la expresión de dos proteínas de fusión, LTB-hIFN-ShdA, LTB-GFP-ShdA para evaluar si el autotransportador ShdA permite la translocación de la proteína verde fluorescente (GFP) y el interferón gamma humano (hIFN-) fuera de la membrana de E. coli. Las secuencias se subclonaron en pET-12. Las cepas BL21SI, BL21(DE3)-pLysS y BL21(DE3)-pRARE se transformaron y se encontró que las proteínas de fusión, LTB-GFP-ShdA y LTB-hIFN-ShdA, son tóxicas para el metabolismo de las cepas usadas en este trabajo. El cambio de temperatura, medio de cultivo y coexpresión de las cepas con pRARE no aumentó significativamente la expresión de las fusiones. Finalmente la proteína LTB-hIFN-ShdA no se detectó fuera de la membrana externa de E. coli. Esto sugiere que la proteína se encuentra anclada en la membrana interna y en cuerpos de inclusión citoplásmicos"

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