Caracterización funcional de dos sitios de degradación proteolítica tipo PEST de la dehidrina de nopal (OpsDHN1)

"Las dehidrinas (DHNs) son proteínas desordenadas y altamente hidrofílicas que se acumulan en respuesta a factores de estrés abiótico en plantas. A pesar de su importancia en la respuesta al estrés, aún se conoce poco sobre estas proteínas, por lo que su mecanismo de acción y su regulación post...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: ADRIANA LETICIA SALAZAR RETANA
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2017
País:México
Institución:Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica
Repositorio:Repositorio Institucional del IPICYT
OAI Identifier:oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/2244
Acceso en línea:http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/2244
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/Autor/Dehidrinas
info:eu-repo/classification/Autor/Proteínas desordenadas
info:eu-repo/classification/Autor/Estrés abiótico
info:eu-repo/classification/Autor/Secuencias PEST
info:eu-repo/classification/Autor/Degradación de proteínas
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/24
info:eu-repo/classification/cti/2415
Descripción
Sumario:"Las dehidrinas (DHNs) son proteínas desordenadas y altamente hidrofílicas que se acumulan en respuesta a factores de estrés abiótico en plantas. A pesar de su importancia en la respuesta al estrés, aún se conoce poco sobre estas proteínas, por lo que su mecanismo de acción y su regulación post-traduccional, son temas importantes para elucidar su función biológica. En este estudio se caracterizaron dos sitios de degradación proteolítica tipo PEST localizados en la región central y C-terminal de la DHN SK3 de Opuntia streptacantha (OpsDHN1). Las secuencias PEST son regiones enriquecidas en prolina (P), ácido glutámico (E), serina (S) y treonina (T), las cuales son señales para la degradación de proteínas a través de la vía ubiquitina-proteosoma 26S. Para evaluar la funcionalidad de las secuencias PEST de la proteína OpsDHN1 como etiquetas de degradación proteolítica, se generó una fusión traduccional entre el gen reportero GUS y el marco de lectura abierto de la OpsDHN1, esta construcción se evaluó en un ensayo de expresión transitorio en hojas de Nicotiana benthamiana y en un sistema de expresión estable generando líneas transgénicas de Arabidopsis thaliana. En ambos sistemas, la construcción mostró un decremento de la señal de GUS. Así mismo, evaluamos sí cada secuencia PEST podría conducir a la degradación de la proteína reportera, para ello fusionamos una región que contenía cada secuencia PEST a GUS, donde observamos que cada secuencia PEST por separado, al igual que la versión completa son capaces de disminuir la actividad de GUS. De manera interesante, la actividad de la proteína reportera GUS se abatió cuando le fusionamos los últimos 126 residuos de la OpsDHN1 que incluyen las dos secuencias PEST. Por otro lado, cuando aplicamos el inhibidor del proteosoma MG132, éste disminuyó el proceso de degradación de la proteína GUS. Por último, realizamos un análisis bioinformático, en donde identificamos que las secuencias PEST son elementos comunes en las DHNs. Este estudio constituye el primer reporte de secuencias PEST involucradas en la degradación de DHNs, lo que es de gran importancia para la comprensión de cómo son reguladas este tipo de proteínas en las plantas."

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