Caracterización del efecto de ISM1 sobre células Leucémicas Humanas

La leucemia linfoblástica aguda (LLA) es el tipo de leucemia más frecuente en individuos pediátricos, siendo la LLA-B la más común (80%-85%) en comparación a la LLA-T (10-15%). La tasa de sobrevivencia a 5 años de LLA infantil en países desarrollados es del 90%, mientras que, en México, es de aproxi...

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Detalhes bibliográficos
Autor: WILLIAM ALEJANDRO AGUIRRE GUILLEN
Formato: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2018
País:México
Recursos:Universidad Autónoma Metropolitana
Repositorio:Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa
Idioma:español
OAI Identifier:oai:bindani.izt.uam.mx:02870v887
Acesso em linha:https://doi.org/10.24275/uami.02870v887
Access Level:acceso abierto
Palavra-chave:info:eu-repo/classification/LEM/Leucemia en niños -- Tratamiento
info:eu-repo/classification/LEM/Sangre -- Enferemedades
info:eu-repo/classification/LEM/Blood -- Diseases
info:eu-repo/classification/LEM/Lymphoblastic leukemia
info:eu-repo/classification/LEM/Hematopoiesis
info:eu-repo/classification/LEM/Hematopoyesis
info:eu-repo/classification/LEM/Leucemia linfoblástica
info:eu-repo/classification/LEM/Leukemia in children -- Treatment
info:eu-repo/classification/cti/2
Descrição
Resumo:La leucemia linfoblástica aguda (LLA) es el tipo de leucemia más frecuente en individuos pediátricos, siendo la LLA-B la más común (80%-85%) en comparación a la LLA-T (10-15%). La tasa de sobrevivencia a 5 años de LLA infantil en países desarrollados es del 90%, mientras que, en México, es de aproximadamente 67%. El desarrollo de nuevos tratamientos contra nuevos blancos terapéuticos es necesario para reducir los efectos secundarios y mejorar la calidad de vida. En este sentido, la proteína de choque térmico GRP78, regulador de la vía UPR, ha demostrado relocalizarse hacia la membrana plasmática preferentemente en células cancerosas, donde actúa como receptor para un número creciente de ligandos promoviendo proliferación o muerte celular dependiendo del ligando. Bajo este contexto, se ha reportado que ISM1, una proteína de secreción de 60 kDa, interacciona con GRP78 en la superficie celular provocando una disfunción mitocondrial que lleva a la muerte celular por apoptosis en células cancerosas. Material y Métodos Con el fin de elucidar si ISM1 promueve un efecto proapoptótico en células de LLA que relocalizan GRP78 hacia la membrana plasmática, primero se determinó, a través de citometría de flujo, la presencia de la proteína en la superficie celular de líneas celulares de LLA- B, LLA- T y muestras de pacientes pediátricos al momento del diagnóstico con LLA. Una vez identificada la población GRP78+ en los modelos de estudio, se estimuló la población total de la línea RS4:11 y células leucémicas de individuos pediátricos con 1µg/mL y 5µg/mL de ISM1 recombinante de ratón respectivamente. Para poder observar el efecto de ISM1 únicamente sobre las células leucémicas GRP78+, se purificaron a través de FACS o columnas inmunomagnéticas. Resultados La línea celular RS4;11 de LLA-B, tuvo la mayor frecuencia de células que relocalizan GRP78 con un 0.56% ± 0.041 de la población en comparación a la línea celular Reh (0.18% ± 0.069) y que sus contrapartes de LLA-T; Jurkat (0.16% ± 0.076) y CCRF (0.16% ± 0.063). Las células de individuos pediátricos al diagnóstico con LLA, presentaron una mayor frecuencia de células GRP78+ en células de médula ósea 3.95% ± 1.38 (n=7) comparadas con las obtenidas de sangre periférica 0.93% ± 0.69 (n=3). Por su parte las células de individuo pediátrico sano tuvieron una frecuencia del 0.57%. El efecto proapoptótico de ISM1, sobre células RS4;11 y células de individuos pediátricos al momento de diagnóstico con LLA, no se logró correlacionar con la frecuencia inicial de células GRP78+ en la población total, sin embargo, en las últimas se observó una reducción en la frecuencia de células GRP78+ bajo el estímulo con ISM1 (11.58%) en comparación al control negativo (15.21%). Finalmente, la purificación de células GRP78+ a través de FACS y columnas inmunomagnéticas en ambos modelos de estudio no fue factible. Conclusiones El estudio determinó que, en frecuencias variables, las células leucémicas humanas relocalizan GRP78 hacia la membrana plasmática, teniendo una mayor frecuencia aquellas de médula ósea. El efecto proapoptótico de ISM1 sobre células leucémicas viii GRP78+ no se logró determinar utilizando la población celular total, sin embargo, la reducción en la frecuencia de células GRP78+ en muestras de individuos pediátricos bajo el tratamiento con ISM1 sugiere la interacción ISM1-GRP78.

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