Obtención y caracterización de anticuerpos policlonales con capacidad de reconocimiento de la neurohormona Liv-CHH-SG1 en Litopenaeus vannamei

En crustáceos, el complejo órgano X-glándula del seno ubicado en el pedúnculo ocular y es uno de los sistemas neuroendocrinos en los cuales se han identificado una variedad de neuropéptidos. La familia de hormonas neuropeptídicas CHH/MIH/GIH comprende a la hormona hiperglucémica de crustáceos (CHH),...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Jennifer Marián Mancera Flores
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2009
País:México
Institución:Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada
Repositorio:Repositorio Institucional CICESE
Idioma:español
OAI Identifier:oai:cicese.repositorioinstitucional.mx:1007/1174
Acceso en línea:http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/1174
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/Autor/Ciencias del mar,Anticuerpos policlonales,Policlonal antibodies,Pichia pastoris,Litopenaeus vannamei
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/24
info:eu-repo/classification/cti/2414
Descripción
Sumario:En crustáceos, el complejo órgano X-glándula del seno ubicado en el pedúnculo ocular y es uno de los sistemas neuroendocrinos en los cuales se han identificado una variedad de neuropéptidos. La familia de hormonas neuropeptídicas CHH/MIH/GIH comprende a la hormona hiperglucémica de crustáceos (CHH), la hormona inhibidora de la muda (MIH) y la hormona inhibidora de las gónadas (GIH). Estos neuropéptidos regulan una amplia variedad de procesos fisiológicos incluyendo, muda, metabolismo de carbohidratos, reproducción y osmoregulación. La neurohormoma Liv-CHHSG1His ya ha sido clonada y expresada en Pichia pastoris y su actividad biológica determinada. Sin embargo, a la fecha no se han obtenido ni caracterizado anticuerpos policlonales con capacidad de reconocimiento de la neurohormona Liv- Liv-CHH-SG1.   La expresión de la neurohormona recombinante Liv-CHH-SG1His se llevó a cabo a partir de una cepa Muts de P. pastoris utilizando medio BMMY con metanol al 4%. La proteína recombinante fue analizada en electroforesis Tricina-SDS-PAGE y corroborada por análisis de Western blot. La proteína fue cuantificada mediante el kit de análisis por BCA y RP-HPLC y utilizada para inmunizar un conejo. La sensibilidad y especificidad de los antisueros obtenidos fue analizada mediante ensayos de ELISA. Finalmente se establecieron las condiciones óptimas para el reconocimiento de la neurohormona recombinante y se realizaron los ensayos de reconocimiento en muestras de hemolinfa obtenidas de camarones sometidos a 28ºC y 35‰.  La neurohormona recombinante Liv-CHH-SG1His expresada en P. pastoris tuvo un rendimiento de 71.43 µg ml<sup>-1</sup>. El suero hiperinmune obtenido a partir de la inmunización del conejo con la neurohormona recombinante presentó valor de titulación de 1:500. Los anticuerpos policlonales (IgG) precipitados a partir del antisuero fueron utilizados para detectar a la neurohormona Liv-CHH-SG1 nativa en muestras de hemolinfa tomadas a lo largo de un ciclo de muda de juveniles de L. vannamei. La técnica estandarizada tuvo un límite mínimo de detección de 1.62 pmol ml<sup>-1</sup> de neurohormona recombinante.  

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