In vitro embryo production in goats by intracytoplasmic sperm injection (ICSI)
El desenvolupament de la tècnica de microinjecció intracitoplasmàtica d'espermatozous (ICSI) va suposar un gran avanç per als laboratoris de reproducció assistida. Aquesta tècnica és de gran utilitat en casos d'infertilitat masculina, gàmetes criopreservats i ovòcits de baixa qualitat. Els...
| Autor: | |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2020 |
| País: | España |
| Institución: | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Repositorio: | Dipòsit Digital de Documents de la UAB |
| Idioma: | inglés |
| OAI Identifier: | oai:ddd.uab.cat:240858 |
| Acceso en línea: | https://ddd.uab.cat/record/240858 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Producció d'embrions Produccion de embriones Embryo production Cabra prepúber Prepubertal goat ICSI Ciències Experimentals |
| Sumario: | El desenvolupament de la tècnica de microinjecció intracitoplasmàtica d'espermatozous (ICSI) va suposar un gran avanç per als laboratoris de reproducció assistida. Aquesta tècnica és de gran utilitat en casos d'infertilitat masculina, gàmetes criopreservats i ovòcits de baixa qualitat. Els oòcits de baixa qualitat són un dels principals factors que afecten negativament la producció d'embrions in vitro tant d'humans com en animals. En aquesta tesi utilitzem els ovòcits de cabra prepúber com a model d'estudi d'ovòcits de baixa qualitat per a: 1) Estudiar l'efecte de la criopreservació de gàmetes masculins i femenins (Estudis 1 i 2) sobre el desenvolupament embrionari després de la ICSI i 2) estudiar l'efecte de la suplementació amb un antioxidant natural, durant la maduració in vitro (MIV) dels oòcits, sobre el seu desenvolupament embrionari després de la ICSI. En el primer estudi comparem la utilització d'espermatozoides frescos i congelats per a la tècnica d'ICSI avaluant el seu efecte en el desenvolupament embrionari i la seva relació amb els paràmetres de capacitació dels espermatozoides. Els resultats van mostrar un nivell significativament més alt de capacitació en els espermatozoides congelats. No obstant això, aquestes diferències no es van traduir en diferències en formació pronuclear o desenvolupament embrionari després d'ICSI. El segon estudi va examinar l'efecte de la vitrificació en oòcits de cabres prepúbers madurats in vitro en: el dany sobre els ovòcits avaluat mitjançant l'anàlisi de les espècies reactives d'oxigen (ROS) i el desenvolupament embrionari amb ICSI i l'activació partenogenètica (AP). Els resultats van mostrar que el grup dels ovòcits vitrificats tenien nivells de ROS més alts en comparació amb els ovòcits no vitrificats. Després de la ICSI la formació normal de zigots i de blastocists no presentava diferències entre els dos grups. No obstant això, després d'AP, la divisió dels ovòcits i la formació de blastocists van disminuir significativament després de la vitrificació. L'estudi 3 va tenir com a objectiu millorar la competència dels oòcits de cabres prepúbers suplementant el medi de maduració amb crocetina, un antioxidant natural. Vam avaluar l'efecte de la crocetina sobre paràmetres moleculars i cel·lulars relacionats amb la competència dels ovòcits (ROS, glutatió (GSH) i activitat mitocondrial) i el desenvolupament embrionari després de fecundació in vitro (FIV), ICSI, i AP. No es van observar diferències significatives en la formació de blastocists entre les diferents concentracions de crocetina 0 µM (control), 0.5 µM, 1 µM i 2 µM després de la FIV. No obstant això, vam demostrar que una concentració de 1 µM de crocetina en el medi de maduració va reduir significativament els nivells de ROS encara que no va modificar la concentració de GSH o l'activitat mitocondrial. Analitzant l'efecte de la crocetina sobre el desenvolupament embrionari després de la ICSI i l'AP no vam observar cap diferència estadísticament significativa en el percentatge de divisió dels ovòcits, la formació de blastocists o el nombre total de cèl·lules per blastòcit entre els grups. No obstant això, en el grup d'ICSI amb crocetina vam observar lleugeres millores com una major divisió dels ovòcits i major formació de blastocists que en els oòcits madurats sense antioxidant. En conclusió, en aquesta tesi vam demostrar que el semen congelat pot ser tan eficient com el semen fresc per produir embrions de oòcits de cabres prepúbers mitjançant ICSI. No obstant això, amb el protocol utilitzat, els oòcits de cabres prepúbers després de la vitrificació no es van poder desenvolupar fins a blastocist després de ser fertilitzats per ICSI. L'addició d'un antioxidant com la crocetina al medi de maduració redueix significativament els nivells de ROS, i pot millorar lleugerament el desenvolupament embrionari després d'ICSI. |
|---|