Optimización de las condiciones de cultivo para mejorar el rendimiento de producción y purificación de las proteínas Cry en Bacillus thuringiensis
Bacillus thuringiensis es un bacilo gram positivo que se caracteriza por la producción de un cristal proteico durante su fase de esporulación, estos cristales están compuestos por una o varias proteínas conocidas como delta endotoxinas, o proteínas Cry, que son ampliamente utilizadas en la agricultu...
| Autor: | |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2014 |
| País: | México |
| Institución: | Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada |
| Repositorio: | Repositorio Institucional CICESE |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:cicese.repositorioinstitucional.mx:1007/622 |
| Acceso en línea: | http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/622 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/Anticancer proteins,Cell culture,Cry proteins,Delta endotoxins,Biotecnología,Proteínas anticancerígenas,Cultivo celular,Proteínas Cry,Delta endotoxinas,Bacillus thuringiensis,Biotechnology info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2414 |
| Sumario: | Bacillus thuringiensis es un bacilo gram positivo que se caracteriza por la producción de un cristal proteico durante su fase de esporulación, estos cristales están compuestos por una o varias proteínas conocidas como delta endotoxinas, o proteínas Cry, que son ampliamente utilizadas en la agricultura contra diversas plagas de insectos. En años recientes se ha descubierto que algunas de estas proteínas son potencialmente utilizables en la industria farmacéutica debido a que presentan toxicidad contra ciertos tipos de líneas celulares de cáncer, sin causar daño a células normales. Lo que ha despertado el interés en su producción y purificación. Un factor clave para la producción de proteínas Cry es la composición del medio de cultivo, sin embargo, otros factores como la oxigenación, el pH y la acción de proteasas producidas por la propia bacteria, también juegan un papel importante para mejorar el rendimiento de producción de las delta endotoxinas. En este proyecto se buscaron las condiciones de cultivo óptimas asociadas a estos factores, con la finalidad de aumentar la producción de la proteína Cry1A que presenta tanto efectos insecticidas como anticancerígenos. Se encontró que la producción de esta proteína aumentó reduciendo la oxigenación, con un pH cercano a 7, a una concentración de NaCl de 5 g/L y con la adición de una fuente de almidón, que beneficia su constitución. Adicionalmente, se empleó un sistema de purificación basado en la diferencia de tamaño de los cristales producidos, con respecto al tamaño de las esporas, permitiendo realizar filtrados que discriminan esporas y células vegetativas. Obteniéndose la proteína de manera sencilla y con las condiciones adecuadas para realizar ensayos de cultivo celular. |
|---|