Expresión de la acetilcolinesterasa en linfocitos T humanos normales y en células leucémicas

La acetilcolinesterasa (AChE) hidroliza al neurotransmisor acetilcolina tras su liberación en las sinapsis colinérgicas. El papel biológico de la AChE no está limitado a la transmisión colinérgica, en tejidos no neuronales se ha detectado actividad acetilcolinesterásica. La AChE se presenta en forma...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: LUIS ANTONIO FLORES LOPEZ
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2008
País:México
Institución:Universidad Autónoma Metropolitana
Repositorio:Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa
Idioma:español
OAI Identifier:oai:bindani.izt.uam.mx:w0892b17j
Acceso en línea:https://doi.org/10.24275/uami.w0892b17j
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/LEM/Glycosylation
info:eu-repo/classification/LEM/Acetylcholinesterase
info:eu-repo/classification/LEM/Glicosilación
info:eu-repo/classification/LEM/Acetilcolinesterasa
info:eu-repo/classification/cti/3
Descripción
Sumario:La acetilcolinesterasa (AChE) hidroliza al neurotransmisor acetilcolina tras su liberación en las sinapsis colinérgicas. El papel biológico de la AChE no está limitado a la transmisión colinérgica, en tejidos no neuronales se ha detectado actividad acetilcolinesterásica. La AChE se presenta en formas globulares como monómeras, dímeras y tetrámeras unidas o no a otros elementos estructurales y en formas asimétricas como tetrámeras, octameras y dodecameras unidos a un tallo colágenico. Las formas moleculares se generan a partir de un gen de 7 Kb, localizado en el cromosoma 7 de humano en la región q22, el cual da origen a tres transcritos. El RNAm con los exones E2-E3-E4-E6 genera subunidades T. El RNAm con E2-E3-E4-E5 genera las subunidades H. En mamíferos se han identificado transcritos R conformados por E2- E3-E4-I4-E5. Es importante conocer cómo se regula la expresión del gen AChE y las formas moleculares que codifica en estados patológicos de proliferación celular (leucemias). Para ello se realizó el análisis de la expresión génica de la acetilcolinesterasa en linfocitos T humanos normales y en células T leucémicas. METODOLOGÍA Se obtuvo sangre periférica de personas sanas, de la cual los leucocitos se aislaron por gradiente de densidad. Los linfocitos T se purificaron con un anticuerpo dirigido contra CD3 adsorbido a perlas magnéticas. El nivel de pureza de linfocitos T se determinó por citometría de flujo usando anti-CD3-PerCP. Para el análisis de AChE en células leucémicas T se utilizó la línea celular T Jurkat E6-1. Para analizar la expresión de la AChE humana se diseñaron primers específicos para los transcritos AChE-H, AChE-T y AChE-R y se determinó su nivel de expresión en ambos tipos celulares por RT-PCR. La AChE de linfocitos T y células Jurkat se extrajo sin y con Triton X-100. La actividad de AChE se midió por el método de Ellman y el contenido de proteínas por el procedimiento propuesto por Bradford. La glicosilación de AChE se estableció usando lectinas de diferente especificidad. Las formas moleculares de la AChE se determinaron por el análisis de sedimentación en gradientes de sacarosa. RESULTADOS Y CONCLUSIONES El análisis de citometría de flujo de los linfocitos T mostró un nivel de pureza del 97%. La expresión del gen AChE mostró que los transcritos en linfocitos T normales correspondieron al tipo AChE-H. En tanto que, en las células leucémicas se detectaron transcritos AChE-H y AChE-T. En linfocitos T normales la actividad específica AChE fue semejante en fracciones S1 y S2. Mientras que, en células leucémicas la fracción S2 presenta menor actividad que S1, lo que indica que existe mayor AChE no ligada o débilmente ligada a la membrana en células leucémicas. La AChE presente en los linfocitos T mostró incorporación de glucosa (33%), manosa (66%), ácido siálico o galactosa (75%) y N-acetil-glucosamina (63%), este hecho resalta su maduración post-traduccional. En el caso de la enzima en células leucémicas, alrededor de un 66% presentó glucosa, un 72% incorporó manosa, un 67% presentó galactosa o ácido siálico y un 67% con N-acetil-glucosamina, señalando una alteración en la maduración post-traduccional en las células leucémicas. El análisis de formas moleculares confirmó que los transcritos AChE-H se encargaron de la síntesis de dímeros (5.2S) y monómeros (3.5S) anclados a la membrana plasmática por un enlace glicofosfatidilinositol). En las células leucémicas los transcritos AChE-T producen tetrámeros hidrofílicos (10.6S), lo cual demostró una alteración de la expresión del gen AChE en tales células.

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