Expresión, purificación y caracterización de la enzima CGI58/ABHD5
"CGI58/ABHD5 es una enzima que participa en el metabolismo de lipidos como activador de la triglicerido lipasa del tejido adiposo(ATGL). Recientemente se ha descrito que CGI58 tiene actividador de lisofosfatidil aciltrasferasa, por lo que se le ha relacionado con procesos de señalizacion en la...
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2014 |
| País: | México |
| Institución: | Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica |
| Repositorio: | Repositorio Institucional del IPICYT |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/646 |
| Acceso en línea: | http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/165 http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/646 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/Ensayo de desplazamiento térmico o Thermoflour info:eu-repo/classification/Autor/Proteinas info:eu-repo/classification/Autor/Purificación info:eu-repo/classification/Autor/Modelo por homologia info:eu-repo/classification/Autor/CGI58 info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2415 |
| Sumario: | "CGI58/ABHD5 es una enzima que participa en el metabolismo de lipidos como activador de la triglicerido lipasa del tejido adiposo(ATGL). Recientemente se ha descrito que CGI58 tiene actividador de lisofosfatidil aciltrasferasa, por lo que se le ha relacionado con procesos de señalizacion en la produccion de lipidos eicosanoides. A pesar de que CGI58 ha sido objeto de numerosos trabajos de investigacion, a la fecha sus estructura tridimensional no ha sido determinada. El objetivo central de este trabajo fue obtener una construccion de CGI58 que se exprese de forma soluble y a una concentracion adecuada para iniciar experimentos de cristalizacion asi resolver su estructura tridimensional por difracción de rayos X. Aqui reportamos el modelo por homologia de CGI58 de humano realizado con I-TASER, el cual se úso para diseñar una construccion deletada de 50 residuos en el extremo N-Terminal. Se generaron seis construcciónes de CGI58, dos con la secuencuia de ráton y cuatro con la de humano, que codifican para la enzima silvestre y una deletada. Cuatro de las seis construcciónes han sido expresadas como proteinas recombinantes en E.coli, la purificación de las mismas ha sido estandarizada utilizando cromatografia de afinidad a niquel. Hemos determinado que el detergente octil glucosido, permite aumentar la concentración de proteina soluble aproximadamente diez veces. Finalmente, observamos que el uso de glicerol al 10%.magnesio 2mM y pH 7.5 tienen un impacto positivo en CGI58. Sin embargo, queda pendiente evaluar el uso de estos aditivos en el proceso de purificación." |
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