Vitrificación de ovocitos porcinos y su efecto a nivel estructural en embriones y en el ADN de las células del cúmulo

La vitrificación es una técnica que se utiliza principalmente para criopreservar embriones y gametos femeninos. Esta técnica permite mantener la viabilidad celular, la funcionalidad y el potencial de desarrollo a bajas temperaturas en nitrógeno líquido a -196 ºC. Para ello, se requiere de la adición...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: ALMA GUADALUPE LOPEZ LOPEZ
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2022
País:México
Institución:Universidad Autónoma Metropolitana
Repositorio:Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa
Idioma:español
OAI Identifier:oai:bindani.izt.uam.mx:7w62f8498
Acceso en línea:https://doi.org/10.24275/uami.7w62f8498
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/LEM/Veterinary embryology
info:eu-repo/classification/LEM/Artificial insemination
info:eu-repo/classification/LEM/Embriología veterinaria
info:eu-repo/classification/LEM/Inseminación artificial
info:eu-repo/classification/cti/3
Descripción
Sumario:La vitrificación es una técnica que se utiliza principalmente para criopreservar embriones y gametos femeninos. Esta técnica permite mantener la viabilidad celular, la funcionalidad y el potencial de desarrollo a bajas temperaturas en nitrógeno líquido a -196 ºC. Para ello, se requiere de la adición de agentes crioprotectores (CPAs), que son sustancias que brindan protección celular durante el enfriamiento y el calentamiento. Sin embargo, se ha informado que son potencialmente tóxicos, reduciendo la viabilidad de los ovocitos, la maduración, la fertilización y el desarrollo embrionario (DE), posiblemente alterando la estructura del citoesqueleto celular y de la cromatina (CR). Estudios previos han evaluado los efectos de la vitrificación de manera directa en ovocitos en vesícula germinal (VG), metafase II (MII), cigotos y blastocistos, pero el conocimiento de su impacto en el desarrollo posterior de los embriones es limitado. Otros estudios han evaluado el papel de los microfilamentos (MF) de actina y de la CR, basados en las tasas obtenidas de la fertilización y del DE, pero no la evaluación directa de estas estructuras en embriones producidos a partir de ovocitos inmaduros vitrificados. Por lo tanto, este estudio fue diseñado para evaluar cómo la vitrificación de ovocitos inmaduros porcinos afecta al desarrollo del embrión temprano mediante la evaluación de la distribución de MF de actina y la integridad de la CR. Los resultados demuestran que el daño generado por la vitrificación de ovocitos inmaduros afecta la viabilidad, la maduración, el DE, la distribución de MF de actina y la integridad de la CR observada en embriones tempranos, pero no afectó la fertilización in vitro. Por lo tanto, se sugiere que la vitrificación podría afectan los mecanismos de reparación de los ovocitos en esas estructuras, siendo uno de los mecanismos que explicar las bajas tasas de DE después de la vitrificación. 5203 Por otro lado, la evaluación del daño del ADN generado en las células del cúmulo (CC) después de la vitrificación de los complejos ovocitos-células del cúmulo (COCs) maduros puede considerarse como indicador de la calidad de los ovocitos, ya que estas células juegan un papel importante en la competencia del desarrollo de los ovocitos. Por lo tanto, el segundo objetivo de este estudio fue determinar si la exposición de los COCs maduros a CPAs o a la vitrificación afectan la viabilidad de los ovocitos y de las CC, además si se genera daño al ADN en las CC, afectando la fertilización y el DE. El daño del ADN en las CC se midió utilizando el ensayo cometa alcalino y se expresó como longitud de la cola del cometa (LCC) y el tiempo momento (OTM, por sus siglas en inglés). Los resultados demuestran que la exposición de los ovocitos a los CPAs (grupo toxicidad) o la vitrificación redujo la viabilidad de los ovocitos (75.5 ± 3.69 %, toxicidad; 66.7 ± 4.57 %, vitrificación) y de las CC (32.7 ± 5.85 %, toxicidad; 7.7 ± 2.21 %, vitrificación) en comparación con el control (95.5 % ± 4.04 %, ovocitos; 89 ± 4.24 %, CC). Además, se generó daño en el ADN significativamente mayor expresado como OTM en las CC después de la exposición a CPAs y vitrificación (39 ± 17.41, 33.6 ± 16.69, respectivamente) en comparación con el control (7.4 ± 4.22). Además, las tasas de fertilización y de DE también disminuyeron después de la exposición a CPAs (35.3 ± 16.65 %, 22.6 ± 3.05 %, respectivamente) y a la vitrificación (32.3 ± 9.29 %, 20 ± 1 %, respectivamente). Este estudio demuestra que la exposición de los ovocitos a los CPAs o a la vitrificación redujo la viabilidad de los ovocitos y de las CC y generó daños en el ADN de las CC, lo que afectó las tasas de fertilización y de DE. Estos hallazgos permitirán comprender algunos de los mecanismos de daño de los ovocitos tras la vitrificación que comprometen su capacidad de desarrollo, así como la búsqueda de nuevas estrategias de vitrificación para incrementar las tasas de fecundación y de DE preservando la integridad de las CC.

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