Purificación y evaluación citotóxica de un anticuerpo tipo vNAR neutralizante de TGF-beta, aislado del tiburón Heterodontus francisci
En este trabajo se clonó y expresó en Pichia pastoris un anticuerpo vNAR neutralizante de la citocina TGF-β, obtenido de una biblioteca no inmune a partir del tiburón Heterodontus francisci. Se ha demostrado que los anticuerpos de dominio sencillo (vNAR) gracias a su pequeño tamaño tienen una profun...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2014 |
| País: | México |
| Institución: | Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada |
| Repositorio: | Repositorio Institucional CICESE |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:cicese.repositorioinstitucional.mx:1007/620 |
| Acceso en línea: | http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/620 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/Tiburón,anticuerpo vNAR info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2414 |
| Sumario: | En este trabajo se clonó y expresó en Pichia pastoris un anticuerpo vNAR neutralizante de la citocina TGF-β, obtenido de una biblioteca no inmune a partir del tiburón Heterodontus francisci. Se ha demostrado que los anticuerpos de dominio sencillo (vNAR) gracias a su pequeño tamaño tienen una profunda penetración en tejidos densos y son rápidamente eliminados del organismo. Estas características los convierten en potenciales agentes terapéuticos y de diagnóstico; sin embargo, la pureza de la proteína es un factor fundamental para su utilización. En el presente trabajo, se logró establecer una condición óptima de purificación para el anticuerpo vNAR anti-TGF-β, mediante el sistema níquel-ácido nitriloacético (Ni-NTA). Se demostró que el anticuerpo mantuvo su actividad, ya que fue capaz de reconocer a la isoforma TGF-β2, y se demostró el reconocimiento de la citocina TGF-β en lágrimas humanas mediante un ensayo colorimétrico. Se realizó un ensayo de citotoxicidad en cultivo primario de hepatocitos de ratón, donde se demostró que el anticuerpo no afecta la supervivencia de estas células al ser empleado a una concentración de 1.5 æg/mL, lo que podría indicar que este anticuerpo no daña a las células de este órgano. Debido a que la desregulación de TGF-β tiene un efecto inmunosupresor en distintas enfermedades infecciosas, este anticuerpo podría ser considerado como un potencial agente terapéutico. |
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