Detección de las caspasas 3 y 7 activas, y de algunos de sus substratos divididos, en los diferentes tipos de células germinales de la rata macho
En las células somáticas y germinales testiculares que mueren por apoptosis, se ha reportado que las caspasas 3 y 7 activas tienen un efecto proteolítico sobre diversas proteínas. Aunque se ha descrito la expresión de las caspasas activas en los espermatozoides de diferentes especies, aún se descono...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2014 |
| País: | México |
| Institución: | Universidad Autónoma Metropolitana |
| Repositorio: | Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:bindani.izt.uam.mx:j6731391b |
| Acceso en línea: | https://doi.org/10.24275/uami.j6731391b |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/LEM/Muerte celular info:eu-repo/classification/LEM/Reproduction info:eu-repo/classification/LEM/Rats -- Reproduction info:eu-repo/classification/LEM/Tecnología reproductiva info:eu-repo/classification/LEM/Apoptosis info:eu-repo/classification/LEM/Reproducción humana info:eu-repo/classification/LEM/Proteins info:eu-repo/classification/LEM/Germ cells info:eu-repo/classification/cti/2 |
| Sumario: | En las células somáticas y germinales testiculares que mueren por apoptosis, se ha reportado que las caspasas 3 y 7 activas tienen un efecto proteolítico sobre diversas proteínas. Aunque se ha descrito la expresión de las caspasas activas en los espermatozoides de diferentes especies, aún se desconoce cuál es la función de tales proteínas en los gametos masculinos. El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de las caspasas 3 y 7, y de algunos de sus substratos divididos, en los espermatozoides y en los diferentes tipos de células germinales testiculares. Para inducir la expresión de las caspasas activas en los espermatozoides de conductos deferentes, obtenidos de ratas control, se utilizó imiquimod y para detectar a las caspasas activas se utilizó al inhibidor fluorescente FLICA; mientras que para inducir la apoptosis de las células germinales testiculares se inyectó, por vía intraperitoneal, pcloroanfetamina a ratas adultas. Se utilizaron anticuerpos específicos para detectar por inmunohistoquímica la presencia de la caspasa 3 y 7 activas y de los fragmentos divididos de la alfa fodrina y de PARP. La detección de los espermatozoides con expresión de las caspasas activas se realizó por citometría de flujo, mientras que la expresión de las caspasas activas y de sus fragmentos divididos en el tejido testicular se realizó por microscopía de fluorescencia y confocal. El porcentaje de espermatozoides con expresión de caspasas activas, marcadas con FLICA, fue significativamente mayor cuando la incubación se realizó en presencia del inductor imiquimod (62.7±2.99 vs 96.7±1.71). No fue posible detectar en los espermatozoides, mediante inmunocitoquímica, a las caspasas activas ni a sus proteínas blanco divididas. En el tejido testicular se detectó la expresión de las caspasas activas, y de su proteínas blanco divididas, en las espermatogonias, los espematocitos y en las espermátidas, pero no en los espermatozoides testiculares. En el caso de las espermátidas alargadas, prontas a liberarse hacia el lumen del túbulo seminífero, la marca de alfa fodrina se observó en la región de las células que da origen a la gota citoplasmática. Nuestros resultados indican que es posible detectar por inmunohistoquímica a las caspasas activas y a sus proteínas blanco divididas, y que esta marca no está presente en los espermatozoides. Lo anterior explica la no detección inmunocitoquímica de los fragmentos divididos en los espermatozoides obtenidos a partir de los conductos deferentes. |
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