PCR en tiempo real anidad para cuantificar los genes E6 y E7 del virus del papiloma humano tipo 16
"El cáncer cervicouterino (CaCu) es la segunda causa de muerte por cáncer entre las mujeres del mundo y la primera en la mayoría de los países en desarrollo. En México mueren cada año cerca de 4,500 mujeres por CaCu. La infección persistente por virus del papiloma humano (VPH) de “alto riesgo”,...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2011 |
| País: | México |
| Institución: | Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica |
| Repositorio: | Repositorio Institucional del IPICYT |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/673 |
| Acceso en línea: | http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/190 http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/673 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/Virus del papiloma humano tipo 16 info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2415 |
| Sumario: | "El cáncer cervicouterino (CaCu) es la segunda causa de muerte por cáncer entre las mujeres del mundo y la primera en la mayoría de los países en desarrollo. En México mueren cada año cerca de 4,500 mujeres por CaCu. La infección persistente por virus del papiloma humano (VPH) de “alto riesgo”, principalmente por el VPH tipo 16 (VPH16) es uno de los principales factores de riesgo para la progresión de las lesiones neoplásicas, aunque no todas las mujeres infectadas con VPH-AR desarrollan cáncer. La integración del genoma viral con deleción parcial del gen viral E2 parece determinante en la progresión hacia el cáncer cervical invasor. La prueba primaria de tamizaje del CaCu es el análisis citológico (Papanicolaou), de sensibilidad y especificidad limitadas para evaluar la progresión de las lesiones neoplásicas, por lo cual es deseable desarrollar marcadores moleculares más objetivos de la progresión neoplásica. Un marcador molecular propuesto es la carga viral (número de copias de genes virales); otro es la integración del genoma viral mediante cuantificación del gen viral regulador E2 y de los oncogenes E6 y E7 para calcular los cosientes E2/E6 y E2/E7, cuyos valores tienden a cero en el estado de integración pura. La mayoría de los estudios de integración se han realizado con PCR en tiempo real (qPCR) de los genes E2 y E6 en presencia del fluorocromo SYBRGreen. En nuestro laboratorio fue desarrollado recientemente un método de qPCR anidada ultrasensible para E6 y E2 con EvaGreen como fluorocromo. MÉTODOS. La estrategia de este trabajo incluyó la generación de las construcciones control pPC301 y pCA401, con los insertos de los genes E6 y E7 de 339 y 252 pares de bases (E6-339 y E7-252) respectivamente, amplificados a partir del genoma de VPH16 y ligados en el vector de clonación pCR4-TOPO, con los cuales obtuvimos transformantes de Escherichia coli TOP10 cuyos plásmidos purificamos." |
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