Desarrollo embrionario bovino in vitro co-cultivado con células oviductales y del cumulus oophorus

La producción in vitro de embriones (PIVE) comprende: la maduración in vitro (MIV) de ovocitos obtenidos por aspiración folicular; la fertilización in vitro (FIV) de estos ovocitos; y el cultivo in vitro de los embriones producidos; siendo la tasa de blastocistos el parámetro para medir su eficacia....

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: YURI GRISEL SOTO MARTINEZ
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2014
País:México
Institución:Universidad Autónoma Metropolitana
Repositorio:Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa
Idioma:español
OAI Identifier:oai:bindani.izt.uam.mx:00000019q
Acceso en línea:https://doi.org/10.24275/uami.00000019q
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/LEM/Embryology
info:eu-repo/classification/LEM/Ganado vacuno
info:eu-repo/classification/LEM/Embriología
info:eu-repo/classification/LEM/Fertilización in vitro
info:eu-repo/classification/LEM/Fertilization in vitro -- Veterinary medicine
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info:eu-repo/classification/LEM/Biología experimental
info:eu-repo/classification/LEM/Biology, Experimental
info:eu-repo/classification/LEM/Cattle
info:eu-repo/classification/LEM/Células de cúmulus oophorus
info:eu-repo/classification/LEM/Células oviductales
info:eu-repo/classification/LEM/Cumulus oophorus cells
info:eu-repo/classification/cti/3
Descripción
Sumario:La producción in vitro de embriones (PIVE) comprende: la maduración in vitro (MIV) de ovocitos obtenidos por aspiración folicular; la fertilización in vitro (FIV) de estos ovocitos; y el cultivo in vitro de los embriones producidos; siendo la tasa de blastocistos el parámetro para medir su eficacia. La PIVE, en el bovino, ha sido motivo de múltiples investigaciones, debido a las bajas tasas de blastocistos obtenidos (5-30%), resultado del constante “bloqueo del desarrollo”; con el fin de evitarlo se han empleado co-cultivos con células somáticas, obteniendo resultados controversiales. La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del co-cultivo de los embriones con células oviductales y del cumulus oophorus sobre el porcentaje de embriones in vitro en estadio de blastocisto. Los oviductos y ovarios fueron colectados de hembras bovinas sacrificadas en un rastro, posteriormente fueron lavados y transportados en solución salina 0.9% a 30-35 °C. Las células oviductales fueron obtenidas tras una incisión longitudinal del oviducto, mientras que las células del cumulus oophorus se colectaron del líquido folicular; ambos tipos celulares se colocaron para su cultivo en TCM-199 con 20% de SFB. Los complejos cumulus-ovocitos (COC’s) fueron colectados por aspiración de folículos de 2 a 7 mm de diámetro y colocados para su maduración en TCM-199 con 10% de SFB, 0.5 µg/mL de FSH y 0.5 µg/mL de LH, a una temperatura de 38.5 °C, 5% CO2 y 95% humedad por 24 horas. Posteriormente se fertilizaron utilizando una concentración de 1x106 espermatozoides/mL. Los presuntos cigotos fueron divididos en tres tratamientos: 1. Control; 2. Co-cultivo con células de cumulus; 3. Co-cultivo con células del oviducto. El desarrollo fue evaluado hasta las 192 horas, determinando la cantidad de embriones divididos, mórulas y blastocistos. La maduración nuclear y la fertilización se evalúo mediante la tinción con Hoechst 33342. La proporción de ovocitos que alcanzaron la metafase II al finalizar su MIV fue de 90%; la tasa de fertilización fue de 84%. Posterior a la FIV fueron co-cultivados 538, 627 y 478 ovocitos en el tratamiento control, cumulus y oviducto, respectivamente. La mayor cantidad de blastocistos (14%) en el co-cultivo de cumulus, menor cantidad en el cocultivo de oviducto (7%) y finalmente la más baja en el control (4%). Se concluye que el uso de medios condicionados con células somáticas puede estimular el desarrollo hasta estadio de blastocisto in vitro de los embriones bovinos.

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