La carga de virus del papiloma humano tipo 16 no correlaciona con las lesiones neoplásicas del cérvix y es consistente con deleciones de los genes virales E2 y E6

"CONTEXTO. El cáncer cervicouterino se desarrolla en infecciones persistentes del epitelio del cuello uterino por virus del papiloma humano (VHP) de al to riesgo, entre los cuales predomina el tipo 16 (VHP16) cuyo genoma -DNA circular de cadena doble codifica seis genes de proteínas no estructu...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: LUISA EUGENIA DEL SOCORRO HERNANDEZ ARTEAGA
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2011
País:México
Institución:Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica
Repositorio:Repositorio Institucional del IPICYT
Idioma:español
OAI Identifier:oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/772
Acceso en línea:http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/444
http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/772
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/Autor/VPH
info:eu-repo/classification/Autor/qPCR
info:eu-repo/classification/Autor/EvaGreen
info:eu-repo/classification/Autor/SYBRGreen
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/24
info:eu-repo/classification/cti/2415
Descripción
Sumario:"CONTEXTO. El cáncer cervicouterino se desarrolla en infecciones persistentes del epitelio del cuello uterino por virus del papiloma humano (VHP) de al to riesgo, entre los cuales predomina el tipo 16 (VHP16) cuyo genoma -DNA circular de cadena doble codifica seis genes de proteínas no estructurales, entre ellos el represor E2 y las oncoproteínas E6 y E7- se replica en el número de las células epiteliales en diferenciación. La integración del genoma viral al genoma celular, aparentemente esencial para iniciar la transformación neoplásica, usualmente se acompaña de escisión/interrupción del gen E2. Las lesiones neoplásicas progresan hasta el cáncer invasor (CC) pasando por infección (IVPH), neoplasia intraepitelial de bajo grado (NIC1) y de alto grado (NIC2 y NIC3). Se supone que en las lesiones de bajo grado predomina el genoma viral en estado plasmídico (con igual número de los genes E2 y E6 y cociente E2/E6 ~1) y en lesiones cancerosas el estado integrado (con pérdida del gen E2 y cociente E2/E6 ~0). La cuantificación del oncogén E6 de VPH16 (E6 - VPH16) mediante PCR en tiempo real (qPCR) con SYBRGreen (fluorocromo intercalante del DNA) ha sido empleada para correlacionar la carga viral y el cociente E2/E6 con el grado de las lesiones neoplásicas. EvaGreen, un nuevo fluorocormo intercalante, ha sido empelado para cuantificar el DNA y propuesto para la qPCR. PROPÓSITO. En este trabajo comparamos la eficiencia de EvaGreen y SYBRGreen para cuantificar E6-VPH16 por qPCR, desarrollamos un método ultrasensible con EvaGreen basado en preamplificación convencional seguida de qPCR anidada para evaluar las cargas de E2 y E6 y el cociente E2/E6. MÉTODOS. Cuantificamos la carga de E2 y E6 en los raspados cervicales de 35 mujeres con lesiones displásicas y cancerosas e infección única por VPH16. RESULTADOS. La cuantificación de E2 y E6 fue reproducible y el promedio de ciclos umbrales (Ct) fue 4.4 ciclos menor con EvaGreen que con SYBRGreen. Los perfiles de extinción térmica de fluorescencia de los productos amplificados de los raspados cerviclaes fueron idénticos a los amplificados a partir del genoma de VPH16 auténtico. Las mezclas de qPCR directa y anidada con diluciones logarítmicas seriadas que contenían 2.5x10^3-2.5x10^6 copias de la construcción pHV101 (con el inserto de E6) dieron valores de Ct en los rangos de 18.7-29.0 y 10.0-25.0, respectivamente."

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