Producción y purificación de β-N-acetilhexosaminidasa en cultivo sumergido de Lecanicillium lecanii inmovilizado en espuma de poliuretano
El objetivo del presente trabajo fue producir y purificar la enzima Nacetilhexosaminidasa (Nhasa) a partir de un cultivo sumergido del hongo Lecanicillium lecanii inmovilizado en espuma de poliuretano, para lo cual se utilizaron las condiciones reportadas por Carrasco y col. (2009) y se probaron dos...
| Autor: | |
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| Formato: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2011 |
| País: | México |
| Recursos: | Universidad Autónoma Metropolitana |
| Repositorio: | Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:bindani.izt.uam.mx:5d86p041b |
| Acesso em linha: | https://doi.org/10.24275/uami.5d86p041b |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palavra-chave: | info:eu-repo/classification/LEM/Células inmovilizadas -- Biotecnología info:eu-repo/classification/LEM/Lecanicillium lecanii -- Biotecnología info:eu-repo/classification/LEM/Immobilized cells Biotechnology info:eu-repo/classification/LEM/Enzymes info:eu-repo/classification/LEM/Biotechnology info:eu-repo/classification/LEM/Lecanicillium lecanii Biotechnology info:eu-repo/classification/LEM/Microbiología -- Cultivo y medios de cultivo info:eu-repo/classification/LEM/Biotecnología info:eu-repo/classification/LEM/Quitinasas info:eu-repo/classification/LEM/Microbiology Crops info:eu-repo/classification/LEM/Chitinase info:eu-repo/classification/cti/6 |
| Resumo: | El objetivo del presente trabajo fue producir y purificar la enzima Nacetilhexosaminidasa (Nhasa) a partir de un cultivo sumergido del hongo Lecanicillium lecanii inmovilizado en espuma de poliuretano, para lo cual se utilizaron las condiciones reportadas por Carrasco y col. (2009) y se probaron dos protocolos de purificación. Inicialmente, se llevó a cabo la cinética de producción Nhasa, para lo que se utilizaron, como inóculo, biopartículas (hongo inmovilizado) en un biorreactor y como control se utilizaron esporas libres. Se encontró que la actividad volumétrica al utilizar biopartículas fue cuatro veces mayor (48.82±6.14 U/L), con respecto al control (11.2±0.26 U/L). De igual modo la mayor actividad específica se obtuvo al utilizar como inóculo las biopartículas obteniéndose 0.25±0.07 U/mg de proteína, mientras que, al inocular el reactor con esporas, solo fue de 0.028±0.0007 U/mg de proteína. En cuanto a la actividad Nhasa/g de sustratos sólidos iniciales (SSI), la mayor actividad se obtuvo en el cultivo con las biopartículas (2.73±0.34 U/gSSI) a diferencia del cultivo inoculado con esporas (0.62±0.014 U/gSSI). Posteriormente, se diseño una estrategia de purificación de una Nhasa a partir del extracto crudo enzimático obtenido del cultivo sumergido inoculado con biopartículas. Para tal fin, se precipitaron las proteínas con 40% de saturación con sulfato de amonio, obteniendo una actividad específica de 4.22±0.6 U/mg de proteína, el sobrenadante se llevo hasta 80% de saturación, obteniéndose en este segundo precipitado una actividad específica de 2±0.18 U/mg de proteína. Los precipitados de 40 y 80% fueron inyectados en una columna de exclusión molecular (Sephacryl™ S-100 High Resolution), separándose fracciones con actividades específicas de 7.92 U/mg y de 0.44 U/mg con factores de purificación de 2.55 y 0.14 para los precipitados al 40% y 80% de El objetivo del presente trabajo fue producir y purificar la enzima Nacetilhexosaminidasa (Nhasa) a partir de un cultivo sumergido del hongo Lecanicillium lecanii inmovilizado en espuma de poliuretano, para lo cual se utilizaron las condiciones reportadas por Carrasco y col. (2009) y se probaron dos protocolos de purificación. Inicialmente, se llevó a cabo la cinética de producción Nhasa, para lo que se utilizaron, como inóculo, biopartículas (hongo inmovilizado) en un biorreactor y como control se utilizaron esporas libres. Se encontró que la actividad volumétrica al utilizar biopartículas fue cuatro veces mayor (48.82±6.14 U/L), con respecto al control (11.2±0.26 U/L). De igual modo la mayor actividad específica se obtuvo al utilizar como inóculo las biopartículas obteniéndose 0.25±0.07 U/mg de proteína, mientras que, al inocular el reactor con esporas, solo fue de 0.028±0.0007 U/mg de proteína. En cuanto a la actividad Nhasa/g de sustratos sólidos iniciales (SSI), la mayor actividad se obtuvo en el cultivo con las biopartículas (2.73±0.34 U/gSSI) a diferencia del cultivo inoculado con esporas (0.62±0.014 U/gSSI). Posteriormente, se diseño una estrategia de purificación de una Nhasa a partir del extracto crudo enzimático obtenido del cultivo sumergido inoculado con biopartículas. Para tal fin, se precipitaron las proteínas con 40% de saturación con sulfato de amonio, obteniendo una actividad específica de 4.22±0.6 U/mg de proteína, el sobrenadante se llevo hasta 80% de saturación, obteniéndose en este segundo precipitado una actividad específica de 2±0.18 U/mg de proteína. Los precipitados de 40 y 80% fueron inyectados en una columna de exclusión molecular (Sephacryl™ S-100 High Resolution), separándose fracciones con actividades específicas de 7.92 U/mg y de 0.44 U/mg con factores de purificación de 2.55 y 0.14 para los precipitados al 40% y 80% de 6 |
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