Estudio de la producción de β-N-acetilglucosaminidasas e hidrofobinas en cultivo sumergido de Lecanicillium lecanii
Lecanicillium lecanii es un hongo entomopatógeno utilizado comercialmente como una alternativa de biocontrol en agricultura y horticultura. Dentro del proceso de infección se producen enzimas y proteínas tales como quitinasas, proteasas, lipasas e hidrofobinas. En la clasificación de las quitinasas...
| Author: | |
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| Format: | doctoral thesis |
| Status: | Published version |
| Publication Date: | 2020 |
| Country: | México |
| Institution: | Universidad Autónoma Metropolitana |
| Repository: | Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa |
| Language: | Spanish |
| OAI Identifier: | oai:bindani.izt.uam.mx:j3860706h |
| Online Access: | https://doi.org/10.24275/uami.j3860706h |
| Access Level: | Open access |
| Keyword: | info:eu-repo/classification/LEM/Lecanicillium lecanii info:eu-repo/classification/LEM/Entomopathogenic fungi -- Mushroom culture info:eu-repo/classification/LEM/Biotechnology info:eu-repo/classification/LEM/Hongos entomopatógenos info:eu-repo/classification/LEM/Biotecnología info:eu-repo/classification/LEM/Agentes biológicos para el control de plagas info:eu-repo/classification/LEM/Biological pest control agents info:eu-repo/classification/cti/6 |
| Summary: | Lecanicillium lecanii es un hongo entomopatógeno utilizado comercialmente como una alternativa de biocontrol en agricultura y horticultura. Dentro del proceso de infección se producen enzimas y proteínas tales como quitinasas, proteasas, lipasas e hidrofobinas. En la clasificación de las quitinasas se encuentran las β-N-acetilglucosaminidasas; que son enzimas capaces de hidrolizar en los extremos no reductores de los residuos de N-acetil-Dglucosamina (GlcNAc) de los oligosacáridos de quitina, liberando monómeros de GlcNAc. Se ha visto que las Hex además de hidrolizar son capaces de llevar a cabo transglicosilación (TGA), transfiriendo un oligosacárido a un aceptor adecuado para formar un nuevo enlace glucosídico; obteniendo así oligosacáridos con grado específico de polimerización y acetilación. Por lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue purificar las Hex e hidrofobinas de Lecanicillium lecanii en cultivo sumergido. En la primera etapa experimental, se purificó la Hex obteniendo una enzima pura de 50 kDa. Se evaluó su actividad TGA sobre sustratos donadores, produciendo oligosacáridos transglicosilados con un grado de polimerización entre 2 y 6 con varios grados de acetilación. En la segunda etapa experimental se identificaron y secuenciaron los péptidos de Hex, los cuales, presentaron identidad con una quitinasa de Rhizopus oligosporus. Adicionalmente, se evaluaron sustratos diferentes a los empleados en la primera etapa, para llevar acabo TGA, donde Hex fue capaz de transglicosilar sin requerir un sustrato aceptor, produciendo oligosacáridos con grado de polimerización de 3 a 6. En la tercera etapa experimental, mediante espectroscopía de dicroísmo circular se observó que Hex no sufre cambios en su estructura secundaria al llevar acabo la reacción de hidrolisis y/o la TGA, o incluso evaluando diferentes temperaturas y valores de pH, lo que se atribuyó a cambios locales en los aminoácidos del sitio activo. Finalmente, en la cuarta etapa, se logró purificar una hidrofobina de clase I de 12 kDa a partir de la biomasa obtenida del cultivo sumergido, esta proteína permitió modificar superficies hidrofóbicas e hidrofílicas. |
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