SOBREEXPRESIÓN DE LA LACTATO DESHIDROGENASA RECOMBINANTE DE CAMARÓN BLANCO Litopenaeus vannamei Y EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

"El metabolismo de los seres vivos es un compendio de proteínas, moléculas y mecanismos de regulación. La glucólisis es la ruta central del metabolismo energético y puede ocurrir en presencia o ausencia de oxígeno. El piruvato es el producto final de la glucólisis como resultado de la degradaci...

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Detalles Bibliográficos
Autor: MANUEL DE JESUS OCHOA VALDEZ
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2012
País:México
Institución:Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo
Repositorio:Repositorio Institucional del CIAD
Idioma:español
OAI Identifier:oai:ciad.repositorioinstitucional.mx:1006/371
Acceso en línea:http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/371
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/Bioquímica. Palabras claves: Lactato deshidrogenasa, ensayos cinéticos, sobreexpresión/Tecnología de alimentos
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/23
Descripción
Sumario:"El metabolismo de los seres vivos es un compendio de proteínas, moléculas y mecanismos de regulación. La glucólisis es la ruta central del metabolismo energético y puede ocurrir en presencia o ausencia de oxígeno. El piruvato es el producto final de la glucólisis como resultado de la degradación de la glucosa. Cuando el oxígeno está presente, el piruvato es transformado en acetil-CoA para seguir los procesos respiratorios, en cambio en su ausencia puede seguir distintos destinos metabólicos que dependerán de las adaptaciones bioquímicas de cada organismo. La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima oxido-reductasa que se encarga de la interconversión de piruvato-lactato en condiciones de baja tensión de oxígeno. La LDH se expresa diferencialmente y está formada por un grupo de 5 isoenzimas en vertebrados. En el camarón blanco Litopenaeus vannamei se conocen 2 subunidades tejido-especificas de la LDH que se expresan mayormente en branquias (LDH1) y músculo (LDH2). Estas subunidades están codificadas en un mismo gen y se expresan por corte y empalme alternativo. El objetivo de este trabajo fue sobreexpresar y caracterizar las 2 subunidades de la LDH. Para la sobreexpresión y purificación se utilizó el sistema comercial IMPACT™. Se sintetizaron los cDNA de mRNA de branquias y músculo que posteriormente se ligaron a un vector de sobreexpresión (pTXB1) para producir una proteína de fusión con afinidad por quitina. La purificación de la LDH2 se hizo por cromatografía en una matriz con quitina inmovilizada que se incubó con DTT para activar la reacción de inteína y eluir la proteína pura (LDH). Los análisis cinéticos se hicieron por espectrofotometría a 340 nm midiendo la oxidación del NADH para calcular Kmap (0.1147 mM) y Vmaxap (22.29 μmoles/min/mg de proteína). También se detectó la actividad por la conversión de lactato a piruvato por zimogramas y por la migración en los geles se deduce que la proteína activa es un tetrámero de 140 kDa."

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