Expresión heteróloga y análisis funcional de una asparaginasa proveniente del arqueón Thermoplasma acidophilum

"Las asparaginasas (amidohidrolasas EC 3.5.1.1) son enzimas que catalizan la hidrólisis de L-asparagina hacia ácido aspártico y amonio, han adquirido importancia por su efecto antineoplásico en el tratamiento de la Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), así como en la industria alimentaria ya que...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: MARIA GUADALUPE SERNA DOMINGUEZ
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2012
País:México
Institución:Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica
Repositorio:Repositorio Institucional del IPICYT
Idioma:español
OAI Identifier:oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/667
Acceso en línea:http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/184
http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/667
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/Autor/Thermoplasma acidophilum
info:eu-repo/classification/Autor/Asparaginasa tipo planta
info:eu-repo/classification/Autor/Leucemia
info:eu-repo/classification/Autor/Ntn-hidrolasas
info:eu-repo/classification/Autor/Asparaginasa
info:eu-repo/classification/Autor/Archaea
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/24
info:eu-repo/classification/cti/2415
Descripción
Sumario:"Las asparaginasas (amidohidrolasas EC 3.5.1.1) son enzimas que catalizan la hidrólisis de L-asparagina hacia ácido aspártico y amonio, han adquirido importancia por su efecto antineoplásico en el tratamiento de la Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), así como en la industria alimentaria ya que reducen la formación de acrilamida en los alimentos. Enzimas con actividad asparaginasa se clasifican en dos grandes grupos: las tipo bacteriano y las tipo planta. Thermoplasma acidophilum es un arqueón extremófilo que cuenta con un marco de lectura abierta (orf por sus siglas en inglés) Ta0338 que codifica una asparaginasa cuyo análisis bioinformático la clasificó dentro de las asparaginasas tipo planta y de la superfamilia de las Ntn-hidrolasas. En este trabajo, el orf Ta0338 se amplificó del genoma de T. acidophilum y se clonó en el vector de expresión pET28a(+). La proteína recombinante se expresó en la cepa de Escherichia coli BL21(DE3)pLysS a 37°C y se purificó por cromatografía de afinidad a níquel con una producción de 9.68 mg/L. Esta proteína mostró un proceso autocatalítico donde el zimógeno de ~32 kDa se autohidroliza generando la subunidad alfa de ~18 kDa y la beta de ~13 kDa. Análisis de electroforesis en condiciones nativas evidenció un complejo heterotetramérico de ~64 kDa, sugiriendo el arreglo típico de las Ntn-hidrolasas (αββα). Datos preliminares revelan la capacidad de la enzima de hidrolizar L-asparagina."

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