Expresión heteróloga y análisis funcional de una asparaginasa proveniente del arqueón Thermoplasma acidophilum
"Las asparaginasas (amidohidrolasas EC 3.5.1.1) son enzimas que catalizan la hidrólisis de L-asparagina hacia ácido aspártico y amonio, han adquirido importancia por su efecto antineoplásico en el tratamiento de la Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), así como en la industria alimentaria ya que...
| Autor: | |
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| Formato: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2012 |
| País: | México |
| Recursos: | Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica |
| Repositorio: | Repositorio Institucional del IPICYT |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/667 |
| Acesso em linha: | http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/184 http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/667 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palavra-chave: | info:eu-repo/classification/Autor/Thermoplasma acidophilum info:eu-repo/classification/Autor/Asparaginasa tipo planta info:eu-repo/classification/Autor/Leucemia info:eu-repo/classification/Autor/Ntn-hidrolasas info:eu-repo/classification/Autor/Asparaginasa info:eu-repo/classification/Autor/Archaea info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2415 |
| Resumo: | "Las asparaginasas (amidohidrolasas EC 3.5.1.1) son enzimas que catalizan la hidrólisis de L-asparagina hacia ácido aspártico y amonio, han adquirido importancia por su efecto antineoplásico en el tratamiento de la Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA), así como en la industria alimentaria ya que reducen la formación de acrilamida en los alimentos. Enzimas con actividad asparaginasa se clasifican en dos grandes grupos: las tipo bacteriano y las tipo planta. Thermoplasma acidophilum es un arqueón extremófilo que cuenta con un marco de lectura abierta (orf por sus siglas en inglés) Ta0338 que codifica una asparaginasa cuyo análisis bioinformático la clasificó dentro de las asparaginasas tipo planta y de la superfamilia de las Ntn-hidrolasas. En este trabajo, el orf Ta0338 se amplificó del genoma de T. acidophilum y se clonó en el vector de expresión pET28a(+). La proteína recombinante se expresó en la cepa de Escherichia coli BL21(DE3)pLysS a 37°C y se purificó por cromatografía de afinidad a níquel con una producción de 9.68 mg/L. Esta proteína mostró un proceso autocatalítico donde el zimógeno de ~32 kDa se autohidroliza generando la subunidad alfa de ~18 kDa y la beta de ~13 kDa. Análisis de electroforesis en condiciones nativas evidenció un complejo heterotetramérico de ~64 kDa, sugiriendo el arreglo típico de las Ntn-hidrolasas (αββα). Datos preliminares revelan la capacidad de la enzima de hidrolizar L-asparagina." |
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