Evaluación funcional de espermatozoides posterior a la separación por columnas magnéticas
El análisis de varianza revela la diferencia estadísticamente significativa del modelo lineal corregido (p<0.025) con potencia observada ≈ 80% y la varianza del término de error es constante en la combinación de los niveles de los factores (Prueba de Levene, p=0.25). El procedimiento mostró un ad...
| Author: | |
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| Format: | master thesis |
| Status: | Published version |
| Publication Date: | 2020 |
| Country: | México |
| Institution: | Universidad Autónoma Metropolitana |
| Repository: | Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa |
| Language: | Spanish |
| OAI Identifier: | oai:bindani.izt.uam.mx:k643b128f |
| Online Access: | https://doi.org/10.24275/uami.k643b128f |
| Access Level: | Open access |
| Keyword: | info:eu-repo/classification/LEM/Apoptosis info:eu-repo/classification/LEM/Spermatozoa info:eu-repo/classification/LEM/Infertilidad masculina info:eu-repo/classification/LEM/Espermatozoides info:eu-repo/classification/LEM/Infertility, Male info:eu-repo/classification/cti/6 |
| Summary: | El análisis de varianza revela la diferencia estadísticamente significativa del modelo lineal corregido (p<0.025) con potencia observada ≈ 80% y la varianza del término de error es constante en la combinación de los niveles de los factores (Prueba de Levene, p=0.25). El procedimiento mostró un adecuado comportamiento en la explicación de la varianza de la media general (p<1x10-7) y de los tratamientos, pero no de la clasificación clínica y la interacción de los tratamientos-clasificación clínica. La proporción de espermatozoides apoptóticos obtenidos por el método de coctel de anticuerpos fue significativamente menor que los derivados por método convencional con MACS (Fc1gl= 5.04, p<0.03). La clasificación clínica de las muestras seminales no muestra diferencia significativa por lo que no sesga los resultados de la separación de los gametos apoptóticos por ambos métodos (p=0.94). No se reveló error de tipo IV (interpretación incorrecta del rechazo correcto de la hipótesis nula) por lo que no se observa efecto del experimentador en la evaluación de los resultados (p=0.76). El estado del acrosoma de los gametos obtenidos de la fracción negativa durante la separación magnética usando el coctel de anticuerpos tuvo un porcentaje del 98%. Después de la evaluación de 10,000 eventos, el 99% de los espermatozoides formaron agregados de JC-1 revelando incremento del potencial mitocondrial y sólo el 0.5% permanecieron de forma monomérica en la fracción negativa en contraste con el 90.8% de los gametos que formaron agregados y el 43.3% que permanecieron como monómeros en la fracción positiva. En conclusión, encontrar una intensidad de florescencia para cada receptor mayor en los donadores fértiles que en los pacientes infértiles nos sugiere que probablemente la apoptosis en el espermatozoide tenga que ser inducida por la concentración de receptores en membrana, por tanto, al ser baja la cantidad de estos, la intensidad de la señal se considera débil y por eso escapan al mecanismo de eliminación, sufriendo así de una apoptosis abortiva. MACS con el coctel de anticuerpos es mejor eliminando las células apoptóticas con ADN fragmentado en comparación con la técnica estándar, células que posteriormente pueden ser utilizadas para TRA. La combinación de MACS con centrifugación en gradiente de doble densidad produce una población limpia de espermatozoides caracterizada por una mayor movilidad, viabilidad y morfología. Además, los espermatozoides tratados por MACS muestran manifestaciones de apoptosis reducidas, incluida la fragmentación del ADN. En este contexto, MACS puede considerarse una técnica de preparación molecular única que complementa los protocolos convencionales de preparación de espermatozoides. |
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