Análisis funcional de la miosina de clase II en la organización apical en el hongo filamentoso Neurospora crassa
El hongo filamentoso Neurospora crassa es un modelo de estudio con crecimiento polarizado como resultado de la distribución controlada de vesículas secretoras a la punta en crecimiento. Uno de los componentes más importantes para el crecimiento polarizado es el citoesqueleto de actina y sus proteína...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2016 |
| País: | México |
| Institución: | Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada |
| Repositorio: | Repositorio Institucional CICESE |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:cicese.repositorioinstitucional.mx:1007/662 |
| Acceso en línea: | http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/662 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/Microbiología info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2414 |
| Sumario: | El hongo filamentoso Neurospora crassa es un modelo de estudio con crecimiento polarizado como resultado de la distribución controlada de vesículas secretoras a la punta en crecimiento. Uno de los componentes más importantes para el crecimiento polarizado es el citoesqueleto de actina y sus proteínas asociadas a actina (ABPs), incluyendo los motores moleculares de la familia de las miosinas. Las miosinas de clase II son proteínas capaces de utilizar la energía química del ATP y formar filamentos bipolares para generar movimiento y fuerza. En el presente trabajo se estudió a la MYO-2, una miosina de clase II de N. crassa y su papel en la morfogénesis y el crecimiento polarizado utilizando una cepa que expresa la MYO-2 fusionada a la proteína verde fluorescente (GFP) y una mutante por deleción (Δmyo-2). La MYO-2-GFP se localizó en el septo, macroconidios y en la punta de la hifa, co-localizando con el Spitzenkörper. La MYO-2-GFP co-localiza con el Spk teñido con FM4-64. El análisis FRAP muestra una recuperación de la fluorescencia del 50% a los 51 segundos y una recuperación total a los 2:10 minutos. Los ensayos con blebistatina muestran que la localización de la MYO-2 es dependiente de su actividad ATPasa ubicada en el dominio motor y la deslocalización provoca cambios en la morfología de la hifa. La cepa mutante Δmyo-2, mostró anormalidades en vacuolas, una reducción de 77% en la tasa de crecimiento, una reducción de la formación de micelio aéreo en un 95%, una reducción del 57% en el diámetro de las hifas, una reducción del 45% en su biomasa y una reducción del 54% en el número de ramificaciones. La septación y conidiación están severamente afectadas, así como la capacidad de controlar daños ante lesiones mecánicas. Las observaciones de la punta de la cepa mutante Δmyo2 muestra que el Spk se encuentra morfológicamente normal en ausencia de la MYO-2, sin embargo, se observa un aumento en los cambios del eje de crecimiento en la cepa mutante Δmyo-2. Los resultados de este trabajo indican que la MYO-2 es fundamental para la formación del septo, liberación de macroconidios y micelio aéreo, se encuentra asociado estructuralmente con Spk y participa en el direccionamiento del crecimiento. |
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