Análisis comparativo del secretoma de Aspergillus brasiliensis obtenido con diferentes concentraciones de sacarosa en cultivo en medio líquido
El presente trabajo comparó el secretoma de A. brasiliensis ATCC 9642 obtenido en cultivo en medio líquido (CML) empleando el medio mínimo Hill y Kafer, con tres concentraciones de sacarosa inicial: 20, 40 y 60 g/L. Las muestras para análisis de los secretomas se tomaron en el tiempo de cultivo en q...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2017 |
| País: | México |
| Institución: | Universidad Autónoma Metropolitana |
| Repositorio: | Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:bindani.izt.uam.mx:gx41mh86p |
| Acceso en línea: | https://doi.org/10.24275/uami.gx41mh86p |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/LEM/Antibióticos info:eu-repo/classification/LEM/Enzimas info:eu-repo/classification/LEM/Ácidos orgánicos info:eu-repo/classification/LEM/Aspergillus info:eu-repo/classification/cti/6 |
| Sumario: | El presente trabajo comparó el secretoma de A. brasiliensis ATCC 9642 obtenido en cultivo en medio líquido (CML) empleando el medio mínimo Hill y Kafer, con tres concentraciones de sacarosa inicial: 20, 40 y 60 g/L. Las muestras para análisis de los secretomas se tomaron en el tiempo de cultivo en que se alcanzó la tasa máxima de producción de CO2, lo que permitió su obtención en cultivos con estados fisiológicos comparables. Los extractos proteicos extracelulares obtenidos fueron concentrados y diafiltrados con membranas de 10 kDa y posteriormente, las proteínas fueron separadas por su punto isoeléctrico (Isoelectroenfoque) y después por sus pesos moleculares (SDS-PAGE). Las imágenes obtenidas de la separación en dos dimensiones (2D-PAGE) se analizaron con el software PDQuest, identificando los “spots” reproducibles entre replicas. De los geles 2D-PAGE se seleccionaron 28 “spots” para análisis de proteínas. Las proteínas en los “spots” fueron digeridas con tripsina. Los péptidos obtenidos fueron analizados por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (LC-MS/MS). Para la caracterización de las secuencias identificadas se emplearon las siguientes bases de datos: BlastP, AspGD, UniProt, ExPASy, KEGG, Pfam, SignalP y SecretomeP y se consideró como microorganismo de referencia A. niger CBS 513.88. Se identificaron 30 proteínas de las cuales 15 participan en el metabolismo de carbohidratos, 5 en reacciones de oxidación-reducción, 2 presentan actividad proteolítica, 2 tienen función de patogénesis y las seis proteínas restantes tienen diferente función. Se demostró que la secreción de proteínas disminuyó conforme aumenta la concentración de sacarosa en el medio, siendo la mitad de éstas, proteínas que participan en el metabolismo de carbohidratos entre las cuales la glucoamilasa se expresa a nivel constitutivo independientemente de la concentración de sacarosa mientras que la abundancia de invertasa disminuye cuando aumenta la concentración de sacarosa. |
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