Utilización de biomarcadores moleculares para la evaluación de toxicidad por exposición a nonilfenol en peces zebra Danio rerio
EI nonilfenol (NP) es un intermediario metabdlico de la transformacién microbiana de los detergentes utilizados en todo el mundo, muestra cierta toxicidad aguda y es capaz de mimificar hormonas importantes resultando en la disrupcién de varios procesos por la interferencia de sefiales que controlan...
| Autor: | |
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| Formato: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2007 |
| País: | México |
| Recursos: | Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada |
| Repositorio: | Repositorio Institucional CICESE |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:cicese.repositorioinstitucional.mx:1007/2404 |
| Acesso em linha: | http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2404 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palavra-chave: | info:eu-repo/classification/Autor/Vitelogenina, Biomarcador, Nonilfenol, Disrupcién endocrina, RT-PCR, Dot blot, Vitellogenin, Biomarkers, Nonylphenol, Endocrine disruption, RT-PC blot info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2414 |
| Resumo: | EI nonilfenol (NP) es un intermediario metabdlico de la transformacién microbiana de los detergentes utilizados en todo el mundo, muestra cierta toxicidad aguda y es capaz de mimificar hormonas importantes resultando en la disrupcién de varios procesos por la interferencia de sefiales que controlan la fisiologia del organismo. Por otro lado, la vitelogenina (Vtg) es un biomarcador importante para el andlisis de la disrupcién endocrina, en particular estimulacién estrogénica, en vertebrados acuaticos. El pez zebra (Danio rerio) es un organismo que ha ganado importancia como nuevo modelo vertebrado en analisis genéticos y de biologia del desarrollo por mas de dos décadas. El efecto del NP ha sido evaluado en pez zebra. Sin embargo, estos trabajos se han llevado a cabo principalmente a nivel embrionario o larval. En este sentido, el objetivo de estatesis fue el evaluar la toxicidad por nonilfenol en una poblacién adulta de pez zebra expuestos a NP, mediante el uso de biomarcadores moleculares (ARNm de Vtg, dafio a ADN cromosomal y proteinas). La estrategia experimental incluyd: a) clonacién del gen de Vtg en ambos sentidos en la bacteria E. coli, b) transcripcién in vitro para la generacién de ARNm sintético sentido para una curva estandar de Vtg y ARNm sintético antisentido para la obtencién de una sonda marcada con biotina, c) la realizacién de los ensayos de retrotranscripcién-reaccién en cadena de la polimerasa (RT-PCR)y dot blot para evaluar la expresién del gen que codifica para la Vtg, d) evaluacién del dafio al ADN cromosomaly proteinas. El ARNm de Vtg mostré ser un buen biomarcador molecular para medir el efecto de xenoestrdgenos como el NP en adultos de pez zebra. Los ensayos de RT-PCRy dotblot mostraron un aumento en la expresién del gen de Vtg en los organismos alimentados con una dieta adicionada con NP a una concentracién de 171 pg g''. Estos resultados coinciden con el incremento observado en los niveles de la proteina Vtg reportado en un estudio paralelo realizado con organismos del mismo lote experimental. Asimismo se observé un efecto de degradacién de las muestras tanto a nivel de acidos nucleicos, como a nivel de proteinas, debido no solo a la exposicién a NP sino también al tiempo y forma de almacenamiento de las muestras. Por lo tanto, para futuros estudios con biomarcadores moleculares se sugiere el trabajo con muestras frescas de tejido de los organismos sometidos al xenoestrégeno. |
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