Estudis sobre la conformació del segment d'activació de la procarboxipeptidasa A porcina i la seva relació amb les proteïnes fixadores de Ca²⁺ de la família EF-hand
Molts enzims i proteïnes fisiològicament actives se sintetitzen en forma de precursors inactius o zimògens. La seva activació per proteòlisi limitada és un mecanisme de regulació enzimàtica. En aquesta treball s'ha estudiat el fragment alliberat en l'activació proteolítica d'un proenz...
| Autores: | , |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2009 |
| País: | España |
| Institución: | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Repositorio: | Dipòsit Digital de Documents de la UAB |
| Idioma: | catalán |
| OAI Identifier: | oai:ddd.uab.cat:55079 |
| Acceso en línea: | https://ddd.uab.cat/record/55079 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Enzims Procarboxipeptidases Proteïnes |
| Sumario: | Molts enzims i proteïnes fisiològicament actives se sintetitzen en forma de precursors inactius o zimògens. La seva activació per proteòlisi limitada és un mecanisme de regulació enzimàtica. En aquesta treball s'ha estudiat el fragment alliberat en l'activació proteolítica d'un proenzim pancreàtic, la procarboxipeptidasa A (PCPA) monomèrica de pàncrees porcí. La caracterització estructural d'aquest segment es va portar a terme estudiant-lo aïllat i unit a l'enzim actiu amb la finalitat d'esbrinar si la conformació que presenta és la mateixa en els dos casos. Els resultats indicaren que un cop alliberat de l'enzim el segment d'activació de la PCPA presenta una conformació diferent amb un elevat grau de flexibilitat conformacional. El segment d'activació aïllat presentà una elevada termoestabilitat, molt superior a la del proenzim, essent el seu procés de desnaturalització reversible i presentant un únic domini estructural. Estudis per ressonància magnètica nuclear indicaren que aquest segment presenta una estructura globular, la qual es manté en un ample marge de valors de pH, i confirmaren l'elevada flexibilitat conformacional. La estructura primària del segment d'activació de la PCPA presentà una similitud important amb proteïnes fixadores de calci de la família EF-hand amb dos potencials regions fixadores de calci. Estudis teòrics de predicció de la seva estructura secundària corroboraren la presència d'aquestes dues regions. A fi de comprovar si aquest segment pertanyia a l'esmentada família proteica es comprovà experimentalment la seva capacitat per a fixar calci. Els resultats indicaren una feble unió de calci, per tant, no es podia considerar aquest segment com a membre de la família de proteïnes fixadores de calci de tipus EF-hand. No obstant, sí que la seva estructura es troba relacionada amb aquesta família de proteïnes ja que es va observar que presentava una sèrie de característiques que també acompleixen les proteïnes d'aquesta família. Va presentar capacitat per a fixar Tb3+, metall que pot substituir al Ca2+ i un comportament en interaccionar amb el colorant Stains-all semblant a la calmodulina, una proteïna que pertany a la família de proteïnes fixadores de calci tipus EF-hand. Els resultats, per tant, permeteren concloure que el segment d'activació de la PCPA de pàncrees porcí està estructuralment relacionat amb les proteïnes fixadores de calci de la família EF-hand. Aquest aspecte és interessant atesa la longitud del segment d'activació estudiat (94 aminoàcids) ja que permet hipotetitzar un possible origen evolutiu d'aquest segment. No és fàcil comprendre que un segment d'aquestes dimensions pugui tenir com a única funció actuar d'inhibidor d'un enzim. |
|---|