Protein signatures in uterine aspirates to improve diagnosis of endometrial cancer "The CEMARK project"
Alrededor del 30% de las pacientes con cáncer de endometrio (CE) son diagnosticadas en un estadio avanzado de la enfermedad, asociado con un drástico descenso de la supervivencia a los 5 años. El diagnóstico se realiza mediante el examen histopatológico de una biopsia endometrial, que se obtiene pre...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2017 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/458514 |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/10803/458514 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Càncer d'endometri Cáncer de endometrio Endometrial cancer Biomarcadors proteics Marcadores proteicos Protein biomarkers Diagnòstic Diagnóstico Diagnosis Ciències Experimentals 57 |
| Sumario: | Alrededor del 30% de las pacientes con cáncer de endometrio (CE) son diagnosticadas en un estadio avanzado de la enfermedad, asociado con un drástico descenso de la supervivencia a los 5 años. El diagnóstico se realiza mediante el examen histopatológico de una biopsia endometrial, que se obtiene preferiblemente mediante una aspiración mínimamente invasiva del interior de la cavidad uterina (aspirado uterino). Desafortunadamente, el número limitado de células en estas biopsias está asociado a dos inconvenientes importantes: i) alrededor del 22% de pacientes no reciben un diagnóstico definitivo con esta muestra; y ii) el tipo histológico y grado de los casos de CE son asignados incorrectamente hasta en el 50% de los casos. El objetivo principal de esta tesis es la identificación de paneles proteicos específicos y sensibles que permitan: i) discriminar todos los casos CE y no-CE empleando muestras de aspirado uterino y así reducir el número de biopsias más invasivas; y ii) proporcionar una información preoperatoria del tipo histológico y el grado tumoral de los casos de CE más precisa para mejorar la clasificación de las pacientes en grupos de riesgo. En el Capítulo 1 se realizó una extensa revisión bibliográfica y se generó una lista de 506 proteínas asociadas con CE. El análisis de las características de los estudios incluidos en esta revisión nos permitió definir nuevas aproximaciones que podrían acelerar la identificación de proteínas clínicamente útiles para el diagnóstico del CE. Estas aproximaciones se aplicaron en los pasos descritos en los siguientes capítulos. Así, en el Capítulo 2 se demostró que esas proteínas previamente asociadas con CE, principalmente estudiadas por inmunohistoquímica a nivel de tejido, se pueden medir en muestras de aspirado uterino mediante técnicas de proteómica dirigida. Además, se seleccionó la fracción líquida de estas muestras como la fracción más apropiada para la identificación de biomarcadores. En el Capítulo 3 se describió un flujo de experimentales para reducir la lista inicial de 506 proteínas a los 52 candidatos con mayor potencial, que fueron analizados en la fracción líquida de aspirados uterinos de 20 pacientes con CE y 18 controles por LC-PRM. Se observó la expresión diferencial de 26 proteínas, y entre ellos diez biomarcadores mostraron una alta sensibilidad y especificidad (AUC> 0.9). Demostramos la importancia de los estudios de verificación por espectrometría de masas dirigida, y destacamos los beneficios del LC-PRM para este propósito. En el Capítulo 4 las mismas 52 proteínas fueron validadas en aspirados uterinos de 116 pacientes por LC-PRM. Los niveles de 28 proteínas eran significativamente mayores en las pacientes de CE (n=69) en comparación con los controles (n=47). La combinación de MMP9 y KPYM alcanzaba un 94% de sensibilidad y un 87% de especificidad para detectar casos de CE. Este panel complementa perfectamente el diagnóstico histopatológico estándar, logrando el 100% de diagnósticos correctos en este estudio. Los niveles de nueve proteínas se encontraron significativamente aumentados en los CE de tipo endometrioide (n=49) comparados con los CE de tipo seroso, más agresivos (n=20). La combinación de CTNB1, XPO2 y CAPG alcanzaba una sensibilidad del 95% y una especificidad del 96% en la discriminación de estos subtipos. Con el fin de facilitar la implementación de estos paneles de biomarcadores en la práctica clínica, se evaluó la transferencia de los resultados de LC-PRM a kits de ELISA disponibles comercialmente. Además, en el Capítulo 5 se evaluó la simplificación del ensayo analítico y de la preparación de la muestra. Se espera que estos paneles proteómicos en aspirado uterino mejoren el diagnóstico de CE, reduciendo el número de biopsias invasivas, ayudando en la predicción del tratamiento quirúrgico óptimo, y reduciendo los costes sanitarios asociados a esta enfermedad. |
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