DNA fetal libre en plasma materno: desarrollo de nuevos métodos de análisis y aplicación clínica en diagnóstico prenatal no invasivo
El descubrimiento del DNA fetal libre circulante, en 1997, abrió nuevas perspectivas en el diagnóstico prenatal, al permitir el acceso a material genético fetal sin el riesgo de pérdida asociado a técnicas invasivas como la amniocentesis o la biopsia corial. A finales del siglo pasado ya se disponía...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2016 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/401105 |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/10803/401105 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Diagnòstic prenatal Diagnóstico prenatal Prenatal diagnosis No invasiu No invasivo Non invasive DNA fetal Fetal DNA Ciències Experimentals 577 |
| Sumario: | El descubrimiento del DNA fetal libre circulante, en 1997, abrió nuevas perspectivas en el diagnóstico prenatal, al permitir el acceso a material genético fetal sin el riesgo de pérdida asociado a técnicas invasivas como la amniocentesis o la biopsia corial. A finales del siglo pasado ya se disponía de técnicas de PCR lo bastante sensibles como para poder detectar pocas copias de una secuencia fetal específica en un elevado background de DNA de origen materno. A partir del año 2000 la aplicación de la cuantificación por PCR a tiempo real ha permitido alcanzar los niveles de sensibilidad y especificidad necesarios para la aplicación clínica de su análisis. El primer marcador de DNA fetal ha sido el gen SRY, cuya detección en plasma materno permite la determinación no invasiva del sexo fetal. La primera aplicación de diagnóstico prenatal no invasivo, basado en la detección de secuencias de DNA heredadas del padre, no presentes en la madre, ha sido la detección del gen RHD en gestantes RhD negativas. La aparición de la secuenciación de nueva generaccion (NGS) y su aplicación al cfDNA en 2008, abre una nueva ventana para la detección no invasiva de aneuploidías fetales. Sin embargo, la introducción de este tipo de ensayos se ha visto relativamente limitada a pocos laboratorios altamente especializados, principalmente debido a la dificultad de desarrollar protocolos diagnósticos específicos, robustos, reproducibles y con acceso a las muestras adecuadas para poder validar los mismos satisfactoriamente antes de su aplicación clínica. En esta tesis doctoral se han desarrollado y validado dos protocolos automatizados para la determinación prenatal no invasiva del RhD y del sexo fetales, llevándose a cabo su aplicación clínica. Los resultados obtenidos en los ensayos de validación de estos dos métodos en un total de 430 muestras han probado su eficiencia y sensibilidad para su implementación en la rutina clínica. La determinación no invasiva del sexo fetal se ha aplicado en 1.251 muestras clínicas consecutivas, y la determinación no invasiva del grupo RhD fetal en 284. Así mismo, se ha validado un nuevo método de detección de aneuploidías fetales que incorpora por primera vez en este tipo de screening la secuenciación masiva bidireccional. La validación se ha llevado a cabo en un total de 1.709 muestras evidenciando que el nuevo método es altamente eficiente, permitiendo la detección de trisomías con una tasa de falsos positivos extremadamente baja (0,03%) y una tasa global de fallos del 0,5%; y sin necesidad de establecer un límite mínimo de fracción fetal para el análisis de las muestras. La detección no invasiva de aneuploidías fetales mediante este ensayo se ha implementado con éxito en la rutina clínica del laboratorio, en 2.828 muestras clínicas entre Octubre de 2015 y Febrero de 2016. |
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