Identificación de proteínas coiled-coil específicas de plantas en el núcleoesqueleto de Allium cepa l. Var. Francesa
Las proteínas de tipo coiled coil son los componentes mayoritarios del núcleoesqueleto (NSK) de metazoos cuya principal familia son las laminas. Las plantas carecen de ortólogos de los genes que codifican para estas proteínas aunque tienen proteínas que son reconocidas por anticuerpos contra ellas,...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2011 |
| País: | España |
| Institución: | Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) |
| Repositorio: | DIGITAL.CSIC. Repositorio Institucional del CSIC |
| OAI Identifier: | oai:digital.csic.es:10261/120927 |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/10261/120927 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Núcleoesqueleto Proteínas coiled-coil |
| Sumario: | Las proteínas de tipo coiled coil son los componentes mayoritarios del núcleoesqueleto (NSK) de metazoos cuya principal familia son las laminas. Las plantas carecen de ortólogos de los genes que codifican para estas proteínas aunque tienen proteínas que son reconocidas por anticuerpos contra ellas, demostrando la conservación de epítopos. Esto nos llevó a formular la hipótesis de que las plantas podrían tener proteínas estructurales del NSK específicas con dominios conservados con las proteínas animales pero con similitud de secuencia muy baja, que constituirían homólogos funcionales de las mismas. El objetivo de esta Tesis Doctoral era investigar las proteínas estructurales de tipo coiled coil en el NSK de células meristemáticas de la planta monocotiledónea Allium cepa, un sistema en el que se conocen abundantes datos sobre su NSK. Se han analizado dos tipos de proteínas con estructura coiled-coil: espectrinas y filamentos intermedios nucleares (NIFs). Las plantas carecen de ortólogos claros de las proteínas de la superfamilia de espectrina pero tienen secuencias que podrían ser homólogos funcionales, así como proteínas que son reconocidas por los anticuerpos antiespectrinas. En este trabajo hemos utilizado anticuerpos contra las cadenas α y β de espectrina eritrocítica de pollo y espectrina no eritrocítica de mamíferos que han demostrado la presencia de proteínas inmunológicamente relacionadas con ellas en el núcleo de Allium cepa y han permitido su caracterización. El análisis inmunoquímico ha revelado dos bandas con movilidad electroforética semejante a las espectrinas α y β (240 y 220 kDa), aunque la más abundante es una banda de 60 kDa con varias formas isoeléctricas con valores entre 5,1 y 5,7 de pI, así como bandas intermedias que corresponden probablemente a productos de degradación proteolítica. Los resultados de inmunofluorescencia e inmunomarcado con oro para ME demostraron una distribución de las proteínas en diferentes dominios nucleares: envoltura nuclear, retículo intercromatínico y pericromatínico, nucleolo y focos nucleares, sugiriendo su implicación en diversas funciones nucleares. La extracción secuencial de los núcleos ha demostrado que estas proteínas son componentes estructurales del NSK subyacente. Mediante inmunoprecipitación hemos revelado la asociación de las proteínas semejantes a espectrina nucleares con actina, demostrando que son proteínas de unión a actina (ABPs) nucleares estructurales en este sistema. Los datos de co-localización mediante inmunofluorescencia confirman que esta asociación ocurre también in situ en el retículo intranuclear y en focos nucleares. El análisis preliminar de secuencias de péptidos de la banda de 60 kDa mediante espectrometría de masas no ha revelado similitud alta con ninguna de las proteínas de la familia de la espectrina aunque mostró similaridad baja con la nesprina-1 humana, una proteína del NSK que contiene repeticiones de espectrina. |
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