Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson

[cat] El nostre grup ha identificat prèviament diferents gens i programes transcripcionals regulats per la proteïna p27. En aquest treball ens centrem en el paper de la proteïna p27 en la regulació a nivell transcripcional de l’expressió del gen que codifica per l’α-sinucleïna (gen SNCA), una proteï...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Domuro Soriano, Carla
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2019
País:España
Institución:Universidad de Barcelona
Repositorio:Dipòsit Digital de la UB
OAI Identifier:oai:diposit.ub.edu:2445/165292
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/2445/165292
http://hdl.handle.net/10803/669150
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Malalties neurodegeneratives
Malaltia de Parkinson
Alfa-sinucleïna
Neurodegenerative Diseases
Parkinson's disease
Alpha-synuclein
id ES_67ddddff6f2c7fca402a78e56b64ccfa
oai_identifier_str oai:diposit.ub.edu:2445/165292
network_acronym_str ES
network_name_str España
repository_id_str
dc.title.none.fl_str_mv Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson
title Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson
spellingShingle Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson
Domuro Soriano, Carla
Malalties neurodegeneratives
Malaltia de Parkinson
Alfa-sinucleïna
Neurodegenerative Diseases
Parkinson's disease
Alpha-synuclein
title_short Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson
title_full Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson
title_fullStr Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson
title_full_unstemmed Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson
title_sort Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de Parkinson
dc.creator.none.fl_str_mv Domuro Soriano, Carla
author Domuro Soriano, Carla
author_facet Domuro Soriano, Carla
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Bachs Valldeneu, Oriol
Pujol Sobrevía, María Jesús
Universitat de Barcelona. Departament de Biomedicina
dc.subject.none.fl_str_mv Malalties neurodegeneratives
Malaltia de Parkinson
Alfa-sinucleïna
Neurodegenerative Diseases
Parkinson's disease
Alpha-synuclein
topic Malalties neurodegeneratives
Malaltia de Parkinson
Alfa-sinucleïna
Neurodegenerative Diseases
Parkinson's disease
Alpha-synuclein
description [cat] El nostre grup ha identificat prèviament diferents gens i programes transcripcionals regulats per la proteïna p27. En aquest treball ens centrem en el paper de la proteïna p27 en la regulació a nivell transcripcional de l’expressió del gen que codifica per l’α-sinucleïna (gen SNCA), una proteïna molt important en el desenvolupament de la malaltia de Parkinson. Específicament, l’α-sinucleïna forma agregats en regions concretes del cervell. En aquest treball hem comprovat que les cèl·lules deficients de p27 presenten nivells més elevats d’α-sinucleïna. Per altra banda, en cervells de ratolins KO de p27 també observem un augment de l’expressió d’α-sinucleïna. Addicionalment, mitjançant la tècnica de silenciament gènic CRISPR/Cas9 vam obtenir línies cèl·lules KO de p27 i E2F4 i en aquestes cèl·lules també s’observa un augment de l’α-sinucleïna. Posteriorment, hem descrit, mitjançant experiments de ChIP i de luciferases, la regulació a nivell transcripcional de p27 del gen SNCA en associació a diferents factors de transcripció, C/EBPδ i E2F4/p130. En ambdós casos l’expressió de p27 reprimeix l’expressió del gen SNCA. A més a més, mitjançant shRNAs i la tècnica de Proximity Ligation Assay (PLA) hem observat com la disminució dels nivells de p27 i p130 també augmenten l’agregació de l’α-sinucleïna. També hem identificat CDK5 com una possible quinasa encarregada de fosforil·lar a p27 i exportar-ho al citoplasma on no pot exercir la seva funció com a regulador transcripcional. Finalment, mitjançant shRNAs vam disminuir els nivells de CDK5, en aquestes cèl·lules i amb la tècnica de PLA hem aconseguit veure com la supressió de CDK5 provoca un augment en l’agregació de l’α-sinucleïna. Com està descrit que CDK5 és capaç d’interaccionar amb els complexes E2F1/pRB, hem caracteritzat la unió de p27 a E2F1 mitjançant columnes cromatogràfiques i hem establert que E2F1 s’uneix a al extrem final de p27, entre els aminoàcids 160-198, de manera similar a la que s’uneix amb E2F4.
publishDate 2019
dc.date.none.fl_str_mv 2019
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv https://hdl.handle.net/2445/165292
http://hdl.handle.net/10803/669150
url https://hdl.handle.net/2445/165292
http://hdl.handle.net/10803/669150
dc.language.none.fl_str_mv Catalán
language_invalid_str_mv Catalán
dc.rights.none.fl_str_mv (c) Domuro, 2019
info:eu-repo/semantics/openAccess
rights_invalid_str_mv (c) Domuro, 2019
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universitat de Barcelona
publisher.none.fl_str_mv Universitat de Barcelona
dc.source.none.fl_str_mv Tesis Doctorals - Departament - Biomedicina
reponame:Dipòsit Digital de la UB
instname:Universidad de Barcelona
instname_str Universidad de Barcelona
reponame_str Dipòsit Digital de la UB
collection Dipòsit Digital de la UB
repository.name.fl_str_mv
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1869409920522125312
spelling Paper de la proteïna p27 en la regulació de l'expressió de l'α-sinucleïna: Implicacions en la malaltia de ParkinsonDomuro Soriano, CarlaMalalties neurodegenerativesMalaltia de ParkinsonAlfa-sinucleïnaNeurodegenerative DiseasesParkinson's diseaseAlpha-synuclein[cat] El nostre grup ha identificat prèviament diferents gens i programes transcripcionals regulats per la proteïna p27. En aquest treball ens centrem en el paper de la proteïna p27 en la regulació a nivell transcripcional de l’expressió del gen que codifica per l’α-sinucleïna (gen SNCA), una proteïna molt important en el desenvolupament de la malaltia de Parkinson. Específicament, l’α-sinucleïna forma agregats en regions concretes del cervell. En aquest treball hem comprovat que les cèl·lules deficients de p27 presenten nivells més elevats d’α-sinucleïna. Per altra banda, en cervells de ratolins KO de p27 també observem un augment de l’expressió d’α-sinucleïna. Addicionalment, mitjançant la tècnica de silenciament gènic CRISPR/Cas9 vam obtenir línies cèl·lules KO de p27 i E2F4 i en aquestes cèl·lules també s’observa un augment de l’α-sinucleïna. Posteriorment, hem descrit, mitjançant experiments de ChIP i de luciferases, la regulació a nivell transcripcional de p27 del gen SNCA en associació a diferents factors de transcripció, C/EBPδ i E2F4/p130. En ambdós casos l’expressió de p27 reprimeix l’expressió del gen SNCA. A més a més, mitjançant shRNAs i la tècnica de Proximity Ligation Assay (PLA) hem observat com la disminució dels nivells de p27 i p130 també augmenten l’agregació de l’α-sinucleïna. També hem identificat CDK5 com una possible quinasa encarregada de fosforil·lar a p27 i exportar-ho al citoplasma on no pot exercir la seva funció com a regulador transcripcional. Finalment, mitjançant shRNAs vam disminuir els nivells de CDK5, en aquestes cèl·lules i amb la tècnica de PLA hem aconseguit veure com la supressió de CDK5 provoca un augment en l’agregació de l’α-sinucleïna. Com està descrit que CDK5 és capaç d’interaccionar amb els complexes E2F1/pRB, hem caracteritzat la unió de p27 a E2F1 mitjançant columnes cromatogràfiques i hem establert que E2F1 s’uneix a al extrem final de p27, entre els aminoàcids 160-198, de manera similar a la que s’uneix amb E2F4.[eng] Our group has identified different transcriptional programs regulated by the protein p27. In this work we focus on the role of p27 in the transcriptional regulation of the gene that encodes for α-synuclein (SNCA gene), a very important protein involved in Parkinson’s disease. Specifically, α-synuclein forms aggregates in specific regions of the brain. In this thesis, we found that p27-deficient cells have higher levels of α-synuclein. On the other hand, in brains of p27 KO mice we also observed an increase in α-synuclein levels in some brain regions. Additionally, using the CRISPR/Cas9 gene silencing technique we obtained KO cell lines of p27 and E2F4 and in these cell lines we also observe an increase of α-synuclein. Subsequently, through ChIP and luciferase assays, we described the transcriptional regulation of p27 of the SNCA gene in association with two different transcription factors, C/EBPδ and E2F4/p130. In both cases, p27 expression supresses SNCA expression. Furthermore, using shRNAs and the Proximity Ligation Assay (PLA) technique, we observed how the decrease of p27 and p130 protein levels also increased α-synuclein aggregation levels. We have also identified CDK5 as a kinase that phosphorylates p27 and cause it exportation to cytoplasm where it cannot function as a transcriptional regulator. Finally, using shRNAs we decreased the levels of CDK5 in these cells and with PLA we were able to see how the decrease of CDK5 levels causes an increase in α-synuclein aggregation levels. As it is described that CDK5 can interact with E2F1/pRb complexes, we have characterized the binding of p27 to E2F1 by affinity chromatography assays and we established that, as occurs with E2F4, E2F1 binds to the carboxyl moiety of p27, between aminoacids 160-170.Universitat de BarcelonaBachs Valldeneu, OriolPujol Sobrevía, María JesúsUniversitat de Barcelona. Departament de Biomedicina2019info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionapplication/pdfhttps://hdl.handle.net/2445/165292http://hdl.handle.net/10803/669150Tesis Doctorals - Departament - Biomedicinareponame:Dipòsit Digital de la UBinstname:Universidad de BarcelonaCatalán(c) Domuro, 2019info:eu-repo/semantics/openAccessoai:diposit.ub.edu:2445/1652922026-05-27T06:46:51Z
score 15,300719

Similares en LA Referencia