Perfil genético funcional en la enfermedad de Crohn complicada. Influencia sobre el desarrollo de recurrencia post-quirúrgica precoz
INTRODUCCIÓN: La resección intestinal en la enfermedad de Crohn (EC) no es un procedimiento curativo ya que la enfermedad suele reaparecer en el sitio de la anastomosis, lo que se conoce como recurrencia post-quirúrgica (RPQ). Desde un punto de vista patogénico, la RPQ representa la oportunidad de a...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2015 |
| País: | España |
| Institución: | CBUC, CESCA |
| Repositorio: | TDR. Tesis Doctorales en Red |
| OAI Identifier: | oai:www.tdx.cat:10803/394012 |
| Acceso en línea: | http://hdl.handle.net/10803/394012 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Malaltia de Crohn Enfermedad de Crohn Crohn's disease Recurrència post-quirúrgica Post-surgical recurrence Genètica funcional Genética funcional Functional genetics Ciències de la Salut 616.3 |
| Sumario: | INTRODUCCIÓN: La resección intestinal en la enfermedad de Crohn (EC) no es un procedimiento curativo ya que la enfermedad suele reaparecer en el sitio de la anastomosis, lo que se conoce como recurrencia post-quirúrgica (RPQ). Desde un punto de vista patogénico, la RPQ representa la oportunidad de asistir al proceso que conduce a la manifestación fenotípica de la EC de novo, y por tanto un escenario que permite estudiar distintos factores involucrados en la patogenia. OBJETIVOS: Estudiar los perfiles de expresión ileal de un grupo de pacientes con EC. Identificar los mecanismos genéticos y transcripcionales asociados a la aparición de la RPQ en la EC. Estudiar el reflejo de estos mecanismos diferenciales en la actividad biológica de la mucosa intestinal. MATERIALES Y MÉTODOS: Se incluyeron pacientes con EC que requirieron una resección ileocecal como parte del tratamiento. Los resultados fueron comparados con un grupo de controles (que requirieron resección ileocecal por otro motivo, sin EC). Se obtuvieron tanto muestras de piezas de resección ileocecal como biopsias de seguimiento endoscópico, además de sangre total. Con esas muestras se llevó a cabo estudio histológico convencional, estudio de polimorfismos basado en genes asociados a la EC, estudio del transcriptoma, bioanálisis, así como experimentos para corroborar los hallazgos del microarray de expresión mediante RT-qPCR y caracterización de marcadores mediante el microarray de proteínas, immunoblotting y estudios de inmunohistoquímica e inmunofluorescencia. RESULTADOS: Se incluyeron 20 pacientes con EC y 10 controles (5 pacientes fueron excluidos por presentar un perfil de expresión completamente diferente al resto de sujetos). Finalmente se analizaron 15 pacientes y 10 controles. De ellos 5 presentaron RPQ precoz. El estudio genómico reveló que la recurrencia se asocia a alteraciones en funciones biológicas relacionadas con la autofagia (IRF1, IRGM) y la apoptosis (TNFSFR6/RTEL1, TNFS11). El estudio transcriptómico mostró que la EC presenta descenso de funciones de desintoxicación celular, de fortalecimiento de las uniones para-celulares, del metabolismo energético y de funciones reguladoras de la inmunidad innata; contrariamente, aparece también una respuesta inflamatoria excesiva junto con una elevada actividad reparativa a nivel de la matriz extracelular. Este estudio detectó que de todos los genes evaluados mediante microarrays, TMIGD1 era el que presentaba un mayor bloqueo en los pacientes con EC. Sin embargo, a pesar de que el transcriptoma ileal no mostró cambios de expresión de TMIGD1 en los pacientes con RPQ, estos presentaron un nivel proteico inferior que el de los pacientes sin RPQ. En el íleon la isoforma predominante de TMIGD1 es de 24 kDa, no está glicosilada y se dispone en los microvilli de las células epiteliales diferenciadas. Por otra parte la RPQ mostró perfiles de expresión disminuidos, entre los que destaca la vía de señalización Notch. En relación a esta vía, varías de las proteínas relacionadas (S100A8, CYCLIN D1, NOTCH2, CEACAM, HNFAG) presentaron una expresión aumentada en los pacientes que desarrollaron RPQ, a excepción del TGFβ1, que estuvo disminuida, lo que podría corresponder a una menor modulación en la diferenciación celular en el epitelio intestinal. De hecho, la caracterización de los linajes de células epiteliales no mostró cambios significativos en ninguna estirpe, a excepción de las células caliciformes, que se encontraron considerablemente aumentadas en las criptas ileales de los pacientes que evolutivamente presentaron RPQ. CONCLUSIONES: Esta es la primera ocasión que se estudia el TMIGD1 en la EC, relacionándose con la diferenciación y recuperación de la homeostasis del epitelio intestinal. La RPQ parece suponer la pérdida del equilibrio homeostático entre proliferación y diferenciación, existiendo una inhibición de la vía del Notch. El aumento de células caliciformes en el tejido ileal podría predecir la RPQ precoz. |
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