Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives

En aquesta tesi doctoral, s’ha desenvolupat metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de prió cel•lular (PrPC) i superòxid dismutasa (SOD-1), dues proteïnes relacionades amb les Encefalopaties Espongiformes Transmissibles (TSEs) i l’Esclerosi Lateral Amiotròfica (ALS),...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Borges Álvarez, Marta
Tipo de recurso: tesis doctoral
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2012
País:España
Institución:CBUC, CESCA
Repositorio:TDR. Tesis Doctorales en Red
OAI Identifier:oai:www.tdx.cat:10803/119540
Acceso en línea:http://hdl.handle.net/10803/119540
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Electroforesi capil·lar
Electroforesis capilar
Capillary electrophoresis
Espectrometria de masses
Espectrometría de masas
Mass spectrometry
Esclerosi lateral amiotròfica
Esclerosis lateral amiotrófica
Amyotrophic lateral sclerosis
Malalties per prions
Enfermedades por priones
Prion diseases
Superòxid dismutasa
Superóxido dismutasa
Superoxide dismutase
Encefalopatia Espongiforme Transmissible
Encefalopatía Espongiforme Transmisible
Transmissible spongiform encephalopathy
Ciències Experimentals i Matemàtiques
543
id ES_482fc8b4e60c808bb367598cfd45c745
oai_identifier_str oai:www.tdx.cat:10803/119540
network_acronym_str ES
network_name_str España
repository_id_str
dc.title.none.fl_str_mv Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives
title Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives
spellingShingle Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives
Borges Álvarez, Marta
Electroforesi capil·lar
Electroforesis capilar
Capillary electrophoresis
Espectrometria de masses
Espectrometría de masas
Mass spectrometry
Esclerosi lateral amiotròfica
Esclerosis lateral amiotrófica
Amyotrophic lateral sclerosis
Malalties per prions
Enfermedades por priones
Prion diseases
Superòxid dismutasa
Superóxido dismutasa
Superoxide dismutase
Encefalopatia Espongiforme Transmissible
Encefalopatía Espongiforme Transmisible
Transmissible spongiform encephalopathy
Ciències Experimentals i Matemàtiques
543
title_short Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives
title_full Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives
title_fullStr Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives
title_full_unstemmed Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives
title_sort Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegeneratives
dc.creator.none.fl_str_mv Borges Álvarez, Marta
author Borges Álvarez, Marta
author_facet Borges Álvarez, Marta
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Sanz Nebot, María Victoria
Benavente Moreno, Fernando J. (Julián)
Universitat de Barcelona. Departament de Química Analítica
dc.subject.none.fl_str_mv Electroforesi capil·lar
Electroforesis capilar
Capillary electrophoresis
Espectrometria de masses
Espectrometría de masas
Mass spectrometry
Esclerosi lateral amiotròfica
Esclerosis lateral amiotrófica
Amyotrophic lateral sclerosis
Malalties per prions
Enfermedades por priones
Prion diseases
Superòxid dismutasa
Superóxido dismutasa
Superoxide dismutase
Encefalopatia Espongiforme Transmissible
Encefalopatía Espongiforme Transmisible
Transmissible spongiform encephalopathy
Ciències Experimentals i Matemàtiques
543
topic Electroforesi capil·lar
Electroforesis capilar
Capillary electrophoresis
Espectrometria de masses
Espectrometría de masas
Mass spectrometry
Esclerosi lateral amiotròfica
Esclerosis lateral amiotrófica
Amyotrophic lateral sclerosis
Malalties per prions
Enfermedades por priones
Prion diseases
Superòxid dismutasa
Superóxido dismutasa
Superoxide dismutase
Encefalopatia Espongiforme Transmissible
Encefalopatía Espongiforme Transmisible
Transmissible spongiform encephalopathy
Ciències Experimentals i Matemàtiques
543
description En aquesta tesi doctoral, s’ha desenvolupat metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de prió cel•lular (PrPC) i superòxid dismutasa (SOD-1), dues proteïnes relacionades amb les Encefalopaties Espongiformes Transmissibles (TSEs) i l’Esclerosi Lateral Amiotròfica (ALS), respectivament. Les TSEs es caracteritzen per l’acumulació de la forma patològica del PrPC (PrPSc) al cervell dels animals afectats, mentre que a l’ALS s’observa la formació d’agregats de SOD-1. Avui dia, encara es desconeixen els factors que inicien i regulen les interaccions que condueixen a la formació d’agregats proteics en moltes malalties neurodegeneratives. Alguns autors suggereixen mecanismes basats en els canvis estructurals que s’observen entre la proteïna nativa i la patològica, que estan relacionats amb la conformació, la seqüència d’aminoàcids, els metalls o les modificacions post-transduccionals. En proteïnes oligomèriques com la SOD-1, també s’ha considerat la dissociació dels oligòmers fins a monòmers abans de l’agregació. És doncs necessari millorar el coneixement de l’estructura d’aquestes proteïnes i aprofundir en els mecanismes que governen l’agregació. En aquest treball es proposa una estratègia de purificació per recuperar de manera eficient PrPC de cervell boví emprant mètodes de purificació convencionals no immuniquímics i western blot (WB) per detectar la presència PrPC en les diferents etapes. Tot seguit s’estudia exhaustivament la separació i caracterització de la SOD-1 mitjançant electroforesi capil•lar acoblada a l’espectrometria de masses amb analitzadors de trampa iònica i de temps de vol (CE-IT-MS i CE-TOF-MS), espectrometria de masses amb font d’ionització per desorció amb làser assistida per una matriu i analitzador de temps de vol (MALDI-TOF-MS) i espectrometria de masses de mobilitat iònica amb font d’ionització per nano-electrosprai (n-ESI-IM-MS). Els estudis amb SOD-1 purificada a partir de mostres de sang d’individus sans i pacients amb ALS han permès obtenir algunes conclusions preliminars interessants sobre els canvis estructurals en la proteïna associats a la malaltia.
publishDate 2012
dc.date.none.fl_str_mv 2012
2013
2013
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10803/119540
url http://hdl.handle.net/10803/119540
dc.language.none.fl_str_mv Catalán
language_invalid_str_mv Catalán
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 199 p.
application/pdf
application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universitat de Barcelona
publisher.none.fl_str_mv Universitat de Barcelona
dc.source.none.fl_str_mv TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)
reponame:TDR. Tesis Doctorales en Red
instname:CBUC, CESCA
instname_str CBUC, CESCA
reponame_str TDR. Tesis Doctorales en Red
collection TDR. Tesis Doctorales en Red
repository.name.fl_str_mv
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1869407343800745984
spelling Establiment de metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de biomarcadors proteics de malalties neurodegenerativesBorges Álvarez, MartaElectroforesi capil·larElectroforesis capilarCapillary electrophoresisEspectrometria de massesEspectrometría de masasMass spectrometryEsclerosi lateral amiotròficaEsclerosis lateral amiotróficaAmyotrophic lateral sclerosisMalalties per prionsEnfermedades por prionesPrion diseasesSuperòxid dismutasaSuperóxido dismutasaSuperoxide dismutaseEncefalopatia Espongiforme TransmissibleEncefalopatía Espongiforme TransmisibleTransmissible spongiform encephalopathyCiències Experimentals i Matemàtiques543En aquesta tesi doctoral, s’ha desenvolupat metodologia analítica per a la purificació, separació i caracterització de prió cel•lular (PrPC) i superòxid dismutasa (SOD-1), dues proteïnes relacionades amb les Encefalopaties Espongiformes Transmissibles (TSEs) i l’Esclerosi Lateral Amiotròfica (ALS), respectivament. Les TSEs es caracteritzen per l’acumulació de la forma patològica del PrPC (PrPSc) al cervell dels animals afectats, mentre que a l’ALS s’observa la formació d’agregats de SOD-1. Avui dia, encara es desconeixen els factors que inicien i regulen les interaccions que condueixen a la formació d’agregats proteics en moltes malalties neurodegeneratives. Alguns autors suggereixen mecanismes basats en els canvis estructurals que s’observen entre la proteïna nativa i la patològica, que estan relacionats amb la conformació, la seqüència d’aminoàcids, els metalls o les modificacions post-transduccionals. En proteïnes oligomèriques com la SOD-1, també s’ha considerat la dissociació dels oligòmers fins a monòmers abans de l’agregació. És doncs necessari millorar el coneixement de l’estructura d’aquestes proteïnes i aprofundir en els mecanismes que governen l’agregació. En aquest treball es proposa una estratègia de purificació per recuperar de manera eficient PrPC de cervell boví emprant mètodes de purificació convencionals no immuniquímics i western blot (WB) per detectar la presència PrPC en les diferents etapes. Tot seguit s’estudia exhaustivament la separació i caracterització de la SOD-1 mitjançant electroforesi capil•lar acoblada a l’espectrometria de masses amb analitzadors de trampa iònica i de temps de vol (CE-IT-MS i CE-TOF-MS), espectrometria de masses amb font d’ionització per desorció amb làser assistida per una matriu i analitzador de temps de vol (MALDI-TOF-MS) i espectrometria de masses de mobilitat iònica amb font d’ionització per nano-electrosprai (n-ESI-IM-MS). Els estudis amb SOD-1 purificada a partir de mostres de sang d’individus sans i pacients amb ALS han permès obtenir algunes conclusions preliminars interessants sobre els canvis estructurals en la proteïna associats a la malaltia.In this thesis, we developed an analytical method for the purification, separation and characterization of cellular prion (PrPC) and superoxide dismutase (SOD-1), two proteins related to Transmissible Spongiform Encephalopathies (TSEs) and the Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS), respectively. The TSEs are characterized by the accumulation of the pathological form of PrPC (PrPSc) in the brain of affected animals, whereas in ALS it is observed the formation of aggregates of SOD-1. Today, factors that initiate and regulate the interactions that lead to the formation of protein aggregates in many neurodegenerative diseases are still unknown. Some authors suggest mechanisms based on the structural changes observed between the native and the pathology protein which cold be related with the conformation, the amino acid sequence, metals or post-translational modifications. In oligomeric proteins such as SOD-1, the dissociation of oligomers to monomers before aggregation it is also considered. So, it is crucial to increase the knowledge of the structure of these proteins and the mechanisms that govern its aggregation for understanding the disease development. This paper proposes a strategy for having an efficient recovery in the purification of bovine brain PrPC using conventional purification methods that not involves immunochemical procedures. The presence of PrPC was checked at different stages by western blot (WB). Then, the separation and characterization of the SOD-1 by capillary electrophoresis coupled to mass spectrometry with ion trap and time of flight analyzers (CE-IT-MS and CE-TOF-MS), matrix-assisted laser desorption/ionization with a time of flight mass analyzer (MALDI-TOF-MS) and ion mobility mass spectrometry with power nano-electrospray ionization source (n-ESI-IM-MS) was studied. The comparison of purified SOD-1 from blood samples of healthy individuals and patients with ALS have yielded some preliminary interesting conclusions about structural changes in the protein associated with cold be related with the disease.Universitat de BarcelonaSanz Nebot, María VictoriaBenavente Moreno, Fernando J. (Julián)Universitat de Barcelona. Departament de Química Analítica201320132012info:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion199 p.application/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10803/119540TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)reponame:TDR. Tesis Doctorales en Redinstname:CBUC, CESCACatalánADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs.info:eu-repo/semantics/openAccessoai:www.tdx.cat:10803/1195402026-06-14T12:46:07Z
score 15,301603

Similares en LA Referencia