Producción in vitro de embriones caprinos

La producci¨®n in vitro (PIV) de embriones caprinos mediante t¨¦cnicas de maduraci¨®n, fecundaci¨®n y cultivo embrionario in vitro (MIV-FIV-CIV) proporciona un elevado n¨²mero de embriones utilizables a nivel cient¨ªfico y/o comercial El objetivo del este estudio ha sido seleccionar ovocitos de cabr...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Rodríguez González, Elisabeth
Tipo de recurso: tesis doctoral
Fecha de publicación:2003
País:España
Institución:Universitat Autònoma de Barcelona
Repositorio:Dipòsit Digital de Documents de la UAB
Idioma:español
OAI Identifier:oai:ddd.uab.cat:36919
Acceso en línea:https://ddd.uab.cat/record/36919
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:Oòcits
Embriologia
Fecundació in vitro humana
Descripción
Sumario:La producci¨®n in vitro (PIV) de embriones caprinos mediante t¨¦cnicas de maduraci¨®n, fecundaci¨®n y cultivo embrionario in vitro (MIV-FIV-CIV) proporciona un elevado n¨²mero de embriones utilizables a nivel cient¨ªfico y/o comercial El objetivo del este estudio ha sido seleccionar ovocitos de cabra prepuber y sistemas de maduraci¨®n in vitro para mejorar la producci¨®n in vitro de embrines. Los ovocitos se maduraron en medio TCM199 + piruvato s¨®dico + L-glutamina + gentamicina + 10% suero bovino de macho castrado (SS) + 10 mg/ml LH + 10 mg/ml o-FSH + 1 mg/ml 17b-estradiol. Tras 27 h de MIV, los ovocitos se inseminaron con semen fresco (3.5x106 espermatozoides/ml) en medio TALP suplementado con 1 mg/ml de hipotaurina. A las 24 h post-inseminaci¨®n, se cultivaron en medio SOFm y se mantuvieron 7 d¨ªas en cultivo. En el Estudio 1, se evalu¨® la utilidad del test de Azul de Cresol Brillante (BCB) para seleccionar los ovocitos de cabras prep¨²beres. Los ovocitos BCB+ (ovocitos con citoplasma coloreado de azul, crecimiento finalizado) presentaron un mayor di¨¢metro (136.6 ¡À 6.3 mm; P<0.001) y mayores tasas de maduraci¨®n nuclear (81.4%; P<0.05), fecundaci¨®n normal (23.5%; P<0.0001) y desarrollo m¨¢s all¨¢ del estadio de 8 c¨¦lulas (41.3%; P<0.001) y de m¨®rulas m¨¢s blastocistos (12.0%; P<0.05) que los ovocitos no coloreados de azul. En el Estudio 2, se utiliz¨® el Factor de Crecimiento Epid¨¦rmico (EGF), para la maduraci¨®n in vitro. Para ello, se compar¨® un medio suplementado con hormonas (LH, FSH y 17b-estradiol) y suero (SS o FCS) con un medio suplementado con 10 ng de EGF en ausencia de suero y hormonas. El porcentaje de ovocitos fecundados de forma normal fue inferior (P<0.05) cuando se emple¨® EGF (17.3%) que SS (SS: 27.2%; FCS: 29.0%). Las tasas de embriones totales (71.5%) y de embriones que superaron el estadio de 8 c¨¦lulas (26.2%) fueron superiores (P<0.05) al emplear SS y hormonas en el medio de maduraci¨®n. En el Estudio 3, se analiz¨® el efecto de la adici¨®n de compuestos tiol (100 ¦ÌM de cisteamina, 100 ¦ÌM de b-mercaptoetanol, 0.57 mM de ciste¨ªna y 0.57 mM de cistina) al medio de MIV. Los ovocitos madurados en presencia de cisteamina y b-mercaptoetanol mostraron mayor capacidad (P<0.01) para formar el pron¨²cleo masculino tras la penetraci¨®n esperm¨¢tica (88.0% y 97.1%) y para ser fecundados (P<0.01) de forma normal (72.0% y 77.1%) comparados con el grupo control (62.2% y 37.8%, respectivamente). Asimismo, la adici¨®n de cisteamina al medio de MIV mejor¨® (P<0.05) el porcentaje de embriones que alcanzaron los estadios de m¨®rula y blastocisto (22.2%) y la tasa de blastocistos expandidos (13.0%) respecto al grupo control (6.4% y 2.6%, respectivamente). La concentraci¨®n de GSH intracelular (pmol/ovocito) fue superior en los ovocitos MIV que en los ovocitos inmaduros. En el Estudio 4 se evalu¨® el efecto de la adici¨®n de cisteamina al medio de maduraci¨®n de ovocitos de cabra prep¨²ber seleccionados mediante el test de Azul de Cresol Brillante (BCB) sobre la maduraci¨®n nuclear, fecundaci¨®n y desarrollo embrionario in vitro. En presencia de cisteamina, el porcentaje de ovocitos BCB+ y madirados con cisteamina mejoraron la maduraci¨®n nuclear, los fecundados normales, la formaci¨®n del pronucleo masculino y el porcentage de embriones a las 8 celulas, comparados con el control y BCB-. En presencia de cisteamina, la formaci¨®n de m¨®rulas y blastocistos fue superior (P<0.001) en los ovocitos BCB+ (23.8%). En conclusi¨®n, la selecci¨®n ovocitaria mediante el test de BCB y la MIV en presencia de cisteamina permiten una mayor capacidad de desarrollo tras MIV-FIV-CIV. Sin embargo, a pesar de obtener resultados aceptables en los par¨¢metros de maduraci¨®n nuclear y de fecundaci¨®n in vitro, el desarrollo embrionario contin¨²a siendo reducido.

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