Participación del complejo mSIN3A/HDAC1 en la regulación transcripcional de genes blanco de CRTC2 durante diferenciación de linfocitos B inducida por estrés genotóxico
Existe una vía alternativa asociada a la diferenciación de células B que es activada por daño al ADN. Esta activación resulta en la fosforilación, inactivación y translocación al citoplasma del co-activador transcripcional CRTC2, lo que resulta en la down-regulación de un set de genes asociados a pr...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2019 |
| País: | Chile |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.anid.cl:10533/237751 |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/10533/237751 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Medicina y Ciencias de la Salud Otras Ciencias Médicas |
| Sumario: | Existe una vía alternativa asociada a la diferenciación de células B que es activada por daño al ADN. Esta activación resulta en la fosforilación, inactivación y translocación al citoplasma del co-activador transcripcional CRTC2, lo que resulta en la down-regulación de un set de genes asociados a proliferación. Resultados preliminares obtenidos por nuestro laboratorio detectaron la interacción de esta proteína con el co-represor transcripcional mSIN3A y la histona de-acetilasa 1 (HDAC1) en una línea de células B (Ramos) y un enriquecimiento de mSIN3A en la región promotora de genes blanco de CRTC2. Considerando esta información nos planteamos la siguiente hipótesis: El complejo mSIN3A/HDAC1 participa en la regulación transcripcional de genes blanco de CRTC2 en células B del centro germinal durante su diferenciación inducida por quiebres al ADN. Para responder esta hipótesis establecimos una serie de objetivos con distintas aproximaciones experimentales. A través de ensayos de Western blot e inmunoprecipitación pudimos no sólo detectar la presencia de estas proteínas, sino que establecer interacciones entre éstas. mSIN3A interacciona con HDAC1 y proteínas del complejo SWI/SNF como Brg1 y Brm, y además interacciona con MeCP2 en células control y bajo estrés genotóxico. Utilizando ensayos de inmunoprecipitación de cromatina pudimos determinar que bajo estrés genotóxico existe un incremento significativo de la localización de mSIN3A y HDAC1 en la región promotora de los genes blanco de CRTC2. Estos resultados se correlacionan con cambios en el perfil de marcas epigenéticas de activación y represión transcripcional analizadas. Existe una disminución en el enriquecimiento de las marcas de activación H3K27Ac y H3K9Ac y un incremento en la marca de represión H3K9me3. Al analizar la importancia de estas proteínas en la regulación transcripcional de estos genes, no pudimos detectar una clara contribución de ellas. A través del uso de sh-RNA y posteriormente inhibidores, detectamos que tanto las aproximaciones metodológicas como el estrés genotóxico contribuyen en la down-regulación de estos genes, posiblemente a través de mecanismos diferentes. Es posible que la activación de vías apoptóticas y un arresto del ciclo celular producto de la transducción lentiviral, y la down-regulación de HDAC1, contribuyan de forma significativa en la down-regulación de los genes de CRTC2 analizados. Es necesario utilizar metodologías adicionales y evaluar marcadores de muerte y ciclo celular con el fin de elucidar los mecanismos implicados en esta regulación. El proceso de diferenciación de linfocitos B mediado por daño al ADN ha demostrado ser un proceso complejo en el que sin lugar a duda participan muchos factores y requiere de más estudio. |
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