Expressão e caracterização das proteínas VP1 e VP2 de parvovírus humano B19 em Pichia pastoris.
O parvovírus B19 é o agente causador de eritemas infecciosos em crianças, hidropsia fetal em mulheres gestantes, esse vírus pode causar anemia crônica e crise aplástica transitória respectivamente. A levedura P. pastoris é um sistema de expressão usado na produção de várias proteínas heterólogas. O...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2007 |
| País: | Brasil |
| Institución: | Universidade de São Paulo (USP) |
| Repositorio: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:teses.usp.br:tde-28012019-162438 |
| Acceso en línea: | http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-28012019-162438/ |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Pichia pastori Pichia pastoris parvovírus B19 Parvovírus B19 Proteína VP1 Proteína VP2 VP1 protein VP2 protein |
| Sumario: | O parvovírus B19 é o agente causador de eritemas infecciosos em crianças, hidropsia fetal em mulheres gestantes, esse vírus pode causar anemia crônica e crise aplástica transitória respectivamente. A levedura P. pastoris é um sistema de expressão usado na produção de várias proteínas heterólogas. O objetivo deste trabalho foi expressar as proteínas VP1 e VP2 do parvovírus humano B19 em levedura P. pastoris. As seqüências gênicas VP1 e VP2 foram amplificadas por PCR, usando DNA do vírus B19, os produtos obtidos foram inicialmente subclonados no vetor pGEM-TEasy. Os fragmentos de DNA foram digeridos com enzima de restrição EcoRI e NotI , purificados e inseridos no vetor de expressão e excreção pPIC9K de P. pastoris, entre os sítios EcoRI e NotI. Para expressão das proteínas recombinantes VP1 e VP2 de parvovírus humano B19, os transformantes foram crescidos em glicerol e induzidos pela adição de metanol. As expressões dos antígenos recombinantes foram analisadas por SDS-PAGE e atividade biológica foram confirmadas pelos ensaios imunológicos ELISA, Dot-Blot e Western Blot. |
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