Participación de la calicreína tisular (KLK1) en la función hipofisaria y el desarrollo de prolactinomas
Los prolactinomas son los adenomas hipofisarios más frecuentes y se caracterizan por una hiperplasia e hipertrofia de lactrotropos, acompañada de una marcada hiperprolactinemia. Entre un 15-20% de pacientes no responden a la terapia actual con agonistas dopaminérgicos y son considerados prolactinoma...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2022 |
| País: | Argentina |
| Institución: | Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Repositorio: | Biblioteca Digital (UBA-FCEN) |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | tesis:tesis_n7117_AbeledoMachado |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7117_AbeledoMachado |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | HIPOFISIS PROLACTINOMA B1R B2R KLK1 TGFβ1 PITUITARY |
| Sumario: | Los prolactinomas son los adenomas hipofisarios más frecuentes y se caracterizan por una hiperplasia e hipertrofia de lactrotropos, acompañada de una marcada hiperprolactinemia. Entre un 15-20% de pacientes no responden a la terapia actual con agonistas dopaminérgicos y son considerados prolactinomas resistentes (DARPs, por sus siglas en inglés). El tratamiento de este tipo de tumores sigue representando un desafío para los endocrinólogos ya que actualmente no existen terapias farmacológicas alternativas a los agonistas dopaminérgicos. En nuestro laboratorio estudiamos diferentes sistemas inhibitorios intrahipofisarios en búsqueda de nuevos blancos terapéuticos. Se ha descripto que calicreína tisular (KLK1) activa TGFβ1, un potente inhibidor de la síntesis y secreción de PRL, en determinados tejidos. Dicha proteasa es conocida por clivar al quininógeno produciendo quininas, los péptidos bioactivos del sistema, que actúan sobre receptores específicos de 7 pasos transmembrana; B1R y B2R. Recientemente se encontró que el B2R se encuentra sobreexpresado (unas 20 veces) en prolactinomas humanos respecto a hipófisis normales. Se ha descripto que B2R y el receptor de dopamina tipo 2 (D2R) pueden formar un heterodímero funcional y que la activación de B2R en el heterodímero anula la cascada de señalización de D2R. Si bien el sistema calicreína-quininas (KKS) es muy conocido por su función en el sistema vascular, su función en hipófisis es desconocida. El objetivo principal de este trabajo es caracterizar al sistema KKS hipofisario y su participación en el control de la función normal y patológica (prolactinoma) del lactotropo. El estudio se llevó a cabo en dos modelos animales de prolactinoma: 1) ratones deficientes del receptor dopaminérgico D2 (Drd2-/-); y; 2) ratones que sonbreexpresan la subunidad β de gonadotrofina coriónica humana (hCGβ). Demostramos que: 1- Los diversos componentes del KKS se expresan localmente en la hipófisis (quininasas I y II, receptores de bradiquinina, B1R y B2R) y su expresión se altera con el desarrollo de un prolactinoma. 2- Existe una marcada diferencia sexual en la expresión de dichos componentes (mayor en machos respecto de las hembras). 3- Los principales factores regulatorios del lactotropo (DA y estradiol) también regulan la expresión génica de los componentes de KKS: DA regula positivamente la expresión de KLK1 y BRs, principalmente en hembras, mientras que estradiol inhibe la expresión génica de KLK1 y B2R en ambos sexos. 4- KLK1 induce la liberación de PRL en ambos sexos. 5- La activación de B1R y B2R con agonistas específicos induce una liberación de PRL en los machos, pero una inhibición de la secreción de PRL en las hembras de forma dosis-dependiente. 6- La formación del heterodímero D2R/B2R por la metodología de NanoBiT® en HEK 293T transfectadas transcientemente (con ambos receptores) y validamos la funcionalidad de B2R mediante el reclutamiento de proteínas Gα (principalmente Gq y en menor medida Gi). 7- En células co-transfectadas con B2R y D2R humano, la activación del B2R promueve la movilización de calcio intracelular y su respuesta no se ve alterada en el heterómero B2R/D2R. 8- Finalmente, mediante la técnica AlphaLiSA validamos la interacción de B2R y D2R en prolactinomas humanos y en adenomas no funcionantes humanos. En el presente trabajo caracterizamos por primera vez al sistema KLK1-quininas hipofisario, encontramos importantes diferencias sexuales en su expresión y alteraciones del sistema con la formación de prolactinomas. Validamos la interacción de B2R/D2R en prolactinomas humanos y encontramos que también interactúan en adenomas hipofisarios no funcionantes. Estos resultados en su conjunto demuestran un rol importante del sistema KLK1-quininas en el control de la secreción de PRL, posicionando al sistema como un modulador intra-hipofisario sexualmente dimórfico con una potencial participación en el desarrollo de prolactinomas. |
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