Estudos comparativos da atividade cinética e trombina-símile de serinoproteases isoladas a partir dos venenos de Bothrops brazili e Bothrops roedingeri
En este estudio, se purificaron dos nuevas serinoproteasas con actividad trombina/similar, denominadas TLBbz y TLBro, a partir de las serpientes Bothrops brazili y Bothrops roedingeri, respectivamente. Ambas enzimas fueron aisladas mediante un solo paso cromatográfico de HPLC de fase reversa, manten...
| Autor: | |
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| Formato: | tesis doctoral |
| Fecha de publicación: | 2013 |
| País: | Perú |
| Recursos: | Superintendencia Nacional de Educación Superior Universitaria |
| Repositorio: | Registro Nacional de Trabajos conducentes a Grados y Títulos - RENATI |
| Idioma: | portugués |
| OAI Identifier: | oai:repositorio.sunedu.gob.pe:20.500.14366/5600 |
| Acesso em linha: | https://hdl.handle.net/20.500.14366/5600 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palavra-chave: | Serinoprotease Bothrops roedingeri Bothrops brazili Cromatografía líquida de alta eficiencia Enzima trombina “like” veneno-purificación https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.00 |
| Resumo: | En este estudio, se purificaron dos nuevas serinoproteasas con actividad trombina/similar, denominadas TLBbz y TLBro, a partir de las serpientes Bothrops brazili y Bothrops roedingeri, respectivamente. Ambas enzimas fueron aisladas mediante un solo paso cromatográfico de HPLC de fase reversa, manteniendo alta pureza y actividad biológica. Físico-químicamente, TLBbz mostró una masa molecular de 35,13 kDa y TLBro de 20,24 kDa por SDS/PAGE. Ambas serinoproteasas exhibieron actividad proteolítica frente al substrato cromogénico DL/BApNA y comportamiento michaeliano con valores de Vmax y KM específicos: TLBbz (Vmax = 1,89 nmoles p = 0,853 mM) y TLBro (Vmax = 0,0432 nmoles p-NA/Lt/min, KM = 0,039 mM). -NA/Lt/min, KM Ambas enzimas mostraron actividad óptima a 38ºC y pH 8,0, siendo inhibidas significativamente por fenilmetilsulfonil fluoride (PMSF) y otros inhibidores. La composición de aminoácidos reveló características ácidas y una buena proporción de aminoácidos hidrofóbicos, indicando estabilidad conformacional con posibles puentes bisulfito. Ambas TLBbz y TLBro hidrolizaron fibrinógeno bovino, actuando como trombina/similar tipo AB y tipo B respectivamente. Además, demostraron capacidad para inducir agregación plaquetaria, inhibida por PMSF. Estos resultados resaltan el potencial biomédico de TLBbz y TLBro, ofreciendo perspectivas para el desarrollo de fármacos que modulen la coagulación y otras aplicaciones terapéuticas. |
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