Generation of a proteomic platform of high processivity for the identification and characterization of recombinant VHHs against CD105

Se obtuvieron diecinueve VHHs (dominios variables únicos de los anticuerpos de cadena pesada) que unen a CD105 (endoglina) humano, un co-receptor endotelial de TFG-β implicado en la regulación de la angiogénesis y el desarrollo de tumores, mediante screening por phage display de una biblioteca de AD...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: Quintana Caceda, Milagros Esther
Tipo de recurso: tesis doctoral
Fecha de publicación:2022
País:Perú
Institución:Universidad Peruana Cayetano Heredia
Repositorio:UPCH-Institucional
Idioma:inglés
OAI Identifier:oai:repositorio.upch.edu.pe:20.500.12866/13184
Acceso en línea:https://hdl.handle.net/20.500.12866/13184
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:VHH
CD105
Spri
Biochip
Nano-Sondas
https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.02
https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.03
https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.09
Descripción
Sumario:Se obtuvieron diecinueve VHHs (dominios variables únicos de los anticuerpos de cadena pesada) que unen a CD105 (endoglina) humano, un co-receptor endotelial de TFG-β implicado en la regulación de la angiogénesis y el desarrollo de tumores, mediante screening por phage display de una biblioteca de ADNc de VHH obtenida de alpacas inmunizadas con un lisado de una línea celular de cáncer de vejiga que sobreexpresa CD105 (T24). Las secuencias de los VHH se analizaron con ExPASY, GeneDoc y BLAST y mostraron las características estructurales típicas de los VHHs. Ellas se clonaron y expresaron en pET22b(+)/E.coli y los VHHs recombinantes se purificaron por cromatografía de afinidad. Trece VHHs anti-CD105 fueron microarreglados en biochips para determinar la especificidad y afinidad a CD105 unido a membrana celular por SPRi, Los datos de SPRi mostraron que los VHHs unen a las células SC, que sobreexpresan CD105, pero no o poco a las células THP-1, que no lo hacen, demostrando especificidad. Los VHHs se agruparon según su especificidad y aproximación de afinidad por SPRi. Los seis VHHs anti-CD105 mejor clasificados, que se unen con alta especificidad y afinidad a CD105 en solución y unido a membrana celular, pueden utilizarse tanto en estudios de la función de CD105 como en nanosondas para el diagnóstico y la terapéutica de enfermedades en que la angiogénesis desempeña un papel importante.

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