Activación por voltaje del canal de cloruro activado por calcio, TMEM16A
"TMEM16A es un canal de cloruro activado por calcio que controla el transporte de líquido epitelial, la contracción del músculo liso, el bloqueo de la poliespermia y la liberación de insulina, entre otros. La activación de TMEM16A es un mecanismo complejo que requiere incrementos de calcio intr...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2020 |
| País: | México |
| Institución: | Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica |
| Repositorio: | Repositorio Institucional del IPICYT |
| OAI Identifier: | oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/2448 |
| Acceso en línea: | http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/2448 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/TMEM16A info:eu-repo/classification/Autor/Activación por voltaje info:eu-repo/classification/Autor/Canales iónicos info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2406 |
| Sumario: | "TMEM16A es un canal de cloruro activado por calcio que controla el transporte de líquido epitelial, la contracción del músculo liso, el bloqueo de la poliespermia y la liberación de insulina, entre otros. La activación de TMEM16A es un mecanismo complejo que requiere incrementos de calcio intracelular y despolarizaciones de la membrana plasmática. TMEM16A no tiene un sensor de voltaje canónico, sin embargo, puede ser activado por la diferencia de voltaje a través de la membrana, aunque el mecanismo aún no está claro. En este trabajo mostramos que el canal TMEM16A silvestre se activa por voltaje en ausencia de calcio. Las corrientes muestran una fuerte rectificación saliente, la activación es muy rápida (<1 ms) y no presentan corrientes de cola. La corriente activada por voltaje depende del anión permeante y se inhibe por los ácidos tánico y antraceno-9-carboxílico. La amplitud de la corriente activada por voltaje es pequeña, sin embargo, se incrementa al eliminar los residuos 448EAVK451 en el primer asa intracelular y al mutar los residuos E702Q-E705Q que forman parte del sitio de unión de calcio. La mutación o eliminación de los residuos 444EEEEEAVK451 modula la activación por calcio y por voltaje, pero no explica la dependencia con el voltaje de TMEM16A. En este trabajo planteamos la hipótesis de que la titulación dependiente de voltaje de los residuos del sitio de unión de calcio permite la activación de TMEM16A. Para probar esto, registramos la actividad del canal a diferentes concentraciones de protones intracelulares. A medida que aumentaba la concentración de protones, incrementaba la corriente activada por voltaje. Para demostrar que estaban involucrados los residuos del sitio de unión de calcio, mutamos los residuos Glutámico / Aspártico a glutamina (para simular un Glutámico protonado permanente). Los canales mutados fueron más fáciles de activar a pH fisiológico. En particular, la respuesta de estos canales mutados a la acidificación intracelular disminuyó y se volvió independiente del voltaje. En conclusión, la protonación dependiente de voltaje de los residuos glutámico / aspártico del sitio de unión de calcio, resalta la activación de TMEM16A por voltaje en ausencia de calcio intracelular. Las corrientes resultantes fueron rápidas, sostenidas y lo suficientemente grandes como para regular la excitabilidad eléctrica." |
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