Determinación de la distribución de balsas lipídicas (lipid rafts) y cuantificación del colesterol de la membrana de espermatozoides criopreservados de cerdo
El proceso de fertilización se caracteriza por una serie de eventos que ocurren tanto en el ovocito como en el espermatozoide, que conducen a la formación del cigoto y finaliza con la formación de un nuevo individuo. Los espermatozoides deben pasar por una serie de eventos moleculares, llamados glob...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2014 |
| País: | México |
| Institución: | Universidad Autónoma Metropolitana |
| Repositorio: | Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:bindani.izt.uam.mx:j6731392m |
| Acceso en línea: | https://doi.org/10.24275/uami.j6731392m |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/LEM/Espermatozoides de cerdos info:eu-repo/classification/LEM/Tecnología reproductiva info:eu-repo/classification/LEM/Spermatozoa -- Swine -- Cryopreservation info:eu-repo/classification/LEM/Cerdos info:eu-repo/classification/LEM/Reproductive technology info:eu-repo/classification/LEM/Swine -- Reproduction info:eu-repo/classification/cti/2 |
| Sumario: | El proceso de fertilización se caracteriza por una serie de eventos que ocurren tanto en el ovocito como en el espermatozoide, que conducen a la formación del cigoto y finaliza con la formación de un nuevo individuo. Los espermatozoides deben pasar por una serie de eventos moleculares, llamados globalmente capacitación. Este proceso involucra el reordenamiento de lípidos y proteínas, cambios en la permeabilidad de iones y la fosforilación de muchas proteínas, así como, la pérdida de colesterol que provoca la reorganización de las balsas lipídicas. Durante la criopreservación, los espermatozoides disminuyen su capacidad fertilizante, esto se ha relacionado con alteraciones en la membrana plasmática. Los espermatozoides de cerdo presentan, hasta la fecha, la mayor dificultad en preservarse. Este efecto se ha relacionado con la composición lipídica de la membrana plasmática. Solo el 2.5 % de los espermatozoides criopreservados conservan su funcionalidad completa (viabilidad, movilidad, morfología y capacidad de fertilización). El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de la criopreservación sobre la distribución de las balsas lipídicas y sobre la concentración de colesterol en la membranade espermatozoides de cerdo. Para determinar los cambios que se presentan en la distribución de balsas lipídicas de espermatozoides de cerdo sometidos a criopreservación, se utilizó la toxina de cólera unido a fluoresceína (CTX-FTC), como marcador del GM1, glucósido que se encuentra acoplado a las balsas lipídicas, comparándolos con las muestras antes de ser criopreservadas y con espermatozoides que se capacitaron in vitro. Encontrándose 5 patrones de distribución de fluorescencia: A: en flagelo y cabeza, B:intensa en la cabeza pero débil en el flagelo, B1: intensa en la cabeza destacando un anillo semicircular y débil en el flagelo, C:intensa en la cabezay D: en la región post-acrosomal de la cabeza y pieza intermedia del flagelo. Las medias para el porcentaje de los patrones encontrados en espermatozoides no capacitados fueron A el 88.7, B el 6.3 y C 5; capacitadosin vitro A el 5.5, B el 22.7 y C 71.8; criopreservados A el57.8, B el 13.9, B1 el 1.7, C el 17.1 y D 9.5. Del análisis de concentración de colesterol de la membrana plasmática utilizando el kit Amplex Red, se encontraron 183.6 µg/ml en espermatozoides no capacitados,147.6 µg/ml en espermatozoides capacitados (p˂0.005), mientras que en el grupo de criopreservados el colesterol solo se encontró en el medio de congelación 487.9 µg/ml. El proceso de criopreservación daña la membrana plasmática de los espermatozoides, provocando la migración de las balsas lipídicas hacia la cabeza del espermatozoide y causa una pérdida importante de colesterol de la membrana plasmática, incrementando enlos espermatozoides capacitados. Sin embargo se requieren otros estudios complementarios tales como análisis de movilidad asistido por computadora, ensayos de reacción acrosomaly cuantificar decolesterol en balsas lipídicas aisladas. |
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