Cuantificación de coliformes fecales en extractos de moluscos bivalvos usando el gen LacZ
Algunas áreas de cultivo de moluscos bivalvos están expuestas a la contaminación de aguas residuales, lo que puede producir la concentración de bacterias conocidas como coliformes fecales. Escherichia coli es la bacteria representativa de este grupo y, cuando está en concentraciones altas, es la cau...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2015 |
| País: | México |
| Institución: | Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada |
| Repositorio: | Repositorio Institucional CICESE |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:cicese.repositorioinstitucional.mx:1007/72 |
| Acceso en línea: | http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/72 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/Moluscos, Hidrólisis, Coliformes fecales info:eu-repo/classification/cti/6 |
| Sumario: | Algunas áreas de cultivo de moluscos bivalvos están expuestas a la contaminación de aguas residuales, lo que puede producir la concentración de bacterias conocidas como coliformes fecales. Escherichia coli es la bacteria representativa de este grupo y, cuando está en concentraciones altas, es la causa principal de enfermedades gastrointestinales al consumidor. Por lo que es importante conocer la concentración de estas bacterias en los moluscos bivalvos antes de su consumo. El método convencional para la detección de coliformes fecales es el número más probable (NMP), el cual, actualmente se basa en ensayos bioquímicos del producto del gen LacZ. Estos ensayos tardan en producir resultados hasta las 48 h. Por lo tanto, la utilización de la técnica molecular de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa o en tiempo real (qPCR) puede ser una alternativa en la disminución del tiempo para procesar una muestra entre 6-8 h. En este estudio se propone un protocolo para la cuanti?cación de coliformes fecales en moluscos bivalvos utilizando el gen LacZ por qPCR que pudiera ayudar a la cuanti?cación. Para ello se utilizó la cepa de E. coli Top10 y se probaron dos condiciones del material genético y dos reporteros para la qPCR. La primer condición fue: DNA de E. coli obtenido a través de un proceso de extracción y puri?cación con un kit comercial. La otra condición fue mediante la liberación del material genético de E. coli por el método de lisis celular térmica (MLCT) de la muestra de homogenado de ostion (HO) a analizar sin extracción ni puri?cación del DNA. El ?uorocromo SYBR Green y una sonda de hidrólisis especí?ca del gen LacZ se usaron como reporteros. Tanto el DNA de E. coli como el MLCT dieron resultados positivos en la ampli?cación al agregarlos directamente al HO. Debido a que el proceso de extracción de DNA no es 100 % e?ciente, se decidió utilizar el MLCT para obtener las curvas estándar con los reporteros. El SYBR Green tuvo como límite de detección 48,000 cel·reacción-1, valor muy por arriba de los límites deseados de detección de 200 cel·reacción-1. Mientras tanto la sonda de hidrólisis con MLCT se lograron detectar muestras hasta 124 cel·reacción-1. Se considera que este procedimiento tiene potencial para su uso en la detección rápida de coliformes fecales en moluscos bivalvos. |
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