Identificación de las glicoproteínas de espermatozoides de cerdo expresadas durante la capacitación
La capacitación es el proceso mediante el que los espermatozoides de mamíferos adquieren la capacidad de fertilizar al ovocito, ocurre en el tracto reproductor femenino, y se caracteriza por cambios en la composición y distribución de los componentes de la superficie del espermatozoide. Entre estos...
| Autor: | |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2006 |
| País: | México |
| Institución: | Universidad Autónoma Metropolitana |
| Repositorio: | Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:bindani.izt.uam.mx:rv042t66f |
| Acceso en línea: | https://doi.org/10.24275/uami.rv042t66f |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/LEM/Cerdos -- Anatomía info:eu-repo/classification/LEM/Espermatozoides -- Fisiología info:eu-repo/classification/LEM/Swine -- Anatomy info:eu-repo/classification/LEM/Spermatozoa -- Physiology info:eu-repo/classification/LEM/Glycoproteins info:eu-repo/classification/LEM/Glucoproteínas info:eu-repo/classification/cti/3 |
| Sumario: | La capacitación es el proceso mediante el que los espermatozoides de mamíferos adquieren la capacidad de fertilizar al ovocito, ocurre en el tracto reproductor femenino, y se caracteriza por cambios en la composición y distribución de los componentes de la superficie del espermatozoide. Entre estos se pierde el colesterol y se redistribuyen las glicoproteínas de membrana plasmática. El objetivo de este estudio fue identificar las glicoproteínas que se expresan en espermatozoides de cerdo capacitados. Se analizaron muestras de espermatozoides normozoospérmicos de cerdo capacitados y no capacitados. Se aislaron glicoproteínas de espermatozoides por cromatografía de afinidad, utilizando las lectinas Con-A y WGA como ligandos fijados a una columna de sefarosa. La fracción retenida por la columna de afinidad se analizó por PAGE-SDS y electroforesis 2D y se secuenciaron los extremos N-terminal por degradación de Edman. La cantidad de proteínas extraídas de espermatozoides capacitados, comparada con la de espermatozoides no capacitados fue menor. En el análisis electroforético se encontró que, después de la capacitación, disminuye la proporción de las proteínas con masa molecular menor a 32 kDa. Estos resultados confirman que algunas proteínas fueron liberadas de la superficie del espermatozoide al realizarse la capacitación in vitro. Por medio de cromatografía de afinidad se encontró que la membrana plasmática de espermatozoides de cerdo presenta un gran número de proteínas unidas a residuos de manosa, N-acetilglucosamina y/o ácido siálico. Las proteínas retenidas por la lectina Con-A de espermatozoides no capacitados tienen masa molecular de entre 14 y 112 kDa. Mediante electroforesis bidimensional de proteínas de espermatozoides no capacitados, se observó que la familia de isoformas de 24 kDa desaparece al igual que las proteínas básicas menores de 20 kDa. Las proteínas totales de espermatozoides capacitados mostraron masas moleculares entre 14 y 102 kDa. Se encontró una banda mayoritaria de 68 kDa y dos de 52 y 47 kDa que corresponden a arilsulfatasa (AS-A), hialuronidasa y lactadherina, respectivamente. El patron de proteínas retenidas por Con-A (RP) mostró bandas de 14 a 98 kDa. La secuencia de la banda de 62 kDa correspondió a AS-A comparándola por BLAST en el banco de genes. La fracción RP por WGA mostró bandas de 14 a 100 kDa. La banda de 65 kDa también correspondió a AS-A. Este estudio demostró que AS-A tiene residuos de manosa y N-acetilglucosamina y/o ácido siálico como parte de su glicosiliación. Palabras clave: Arilsulfatasa-A, capacitación espermática, Con-A, espermatozoides de cerdo, WGA. |
|---|