CARACTERIZACIÓN DE LA PROTEÍNA NprR DE Bacillus thuringiensis
Bacillus thuringiensis (Bt) es un bacilo esporulado y Gram positivo que produce durante la esporulación, un cristal compuesto de toxinas Cry. Es importante entender cómo se regula la esporulación para incrementar los rendimientos de las endotoxinas, debido a su utilización como bioinsecticida. En ot...
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2009 |
| País: | México |
| Institución: | Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo |
| Repositorio: | Repositorio Institucional del CIAD |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:ciad.repositorioinstitucional.mx:1006/658 |
| Acceso en línea: | http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/658 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/BIOTECNOLOGÍA/TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS DE ORIGEN VEGETAL info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/23 |
| Sumario: | Bacillus thuringiensis (Bt) es un bacilo esporulado y Gram positivo que produce durante la esporulación, un cristal compuesto de toxinas Cry. Es importante entender cómo se regula la esporulación para incrementar los rendimientos de las endotoxinas, debido a su utilización como bioinsecticida. En otro bacilo, Bacillus subtilis, el inicio de la esporulación es controlado por un sistema de transducción de señales donde participan proteínas cinasas, fosfatasas y reguladoras de respuesta. NprR, una proteína de Bt, se ha identificado como factor de transcripción putativo, consta de 423 aminoácidos (46 KDa), tiene motivos repetición tetratricopétido (TPR) y uno hélíce-vuelta-hélice (HTH), sin embargo no se tiene evidencia de su función. El objetivo general de este trabajo fue caracterizar a NprR recombinante e investigar su capacidad de unión con el ADN. Para esto, la proteína se sobreexpresó en Escheríchia coli con una cola de histidinas añadida y se purificó a homogeneidad mediante cromatografía de afinidad a níquel, obteniéndose un rendimiento final de 8.14 mg por litro de cultivo bacteriano. El contenido de estructura secundaria se determinó por análisis de dicroísmo circular (CD), donde la proteína mostró una mayor proporción de estructura ordenada, indicando con ello que la proteína se plegó in vitro. Así mismo, se evaluó el cambio conformacional inducido por la interacción con ADN mediante CD y fluorescencia. Los resultados mostraron que no ocurre un cambio conformacional importante. Estos cambios sugieren que probablemente es necesario un factor adicional para lograr una interacción directa entre el ADN blanco y la proteína. Finalmente, no se encontró unión al ADN bajo las condiciones probadas en el ensayo de retardo en la movilidad electroforética (EMSA). Lo anterior, da pie a la realización de futuros estudios para demostrar su capacidad de unión, enfocados a la utilización de péptidos de señalización como factores que controlan la interacción de NprR con su ADN blanco. |
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