Producción de peroxidasa recombinante de nabo PodC empleando la cepa de E. coli Rosetta 2 transformada con el gen podC por cultivo en lote y auto-inducción
PodC es una enzima con actividad peroxidasa que puede tener diversas aplicaciones como la remoción de compuestos fenólicos de agua y su empleo en biosensores. No obstante, es necesario mejorar su proceso de producción para permitir que el proceso sea redituable, permitiendo aumentar su disponibilida...
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2015 |
| País: | México |
| Institución: | Universidad Autónoma de Querétaro |
| Repositorio: | Repositorio Institucional de la Universidad Autónoma de Querétaro |
| OAI Identifier: | oai:ri-ng.uaq.mx:123456789/725 |
| Acceso en línea: | http://ri-ng.uaq.mx/handle/123456789/725 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | Autoinduction culture Batch culture Cultivo por auto-inducción Cultivo por lote PodC BIOLOGÍA Y QUÍMICA |
| Sumario: | PodC es una enzima con actividad peroxidasa que puede tener diversas aplicaciones como la remoción de compuestos fenólicos de agua y su empleo en biosensores. No obstante, es necesario mejorar su proceso de producción para permitir que el proceso sea redituable, permitiendo aumentar su disponibilidad. Por lo que el objetivo del presente trabajo fue evaluar la producción de PodC bajo dos estrategias de cultivo. Además, se realizó la caracterización cinética de la cepa transformante, encontrando que sus parámetros cinéticos fueron inferiores (¿= 0.51±0.014 h-1 y td= 1.34±0.037 h) en comparación con los parámetros cinéticos de la cepa parental (¿= 0.62±0.011 h-1 y td= 1.10±0.020 h). Se eligió el inductor lactosa para su uso en los cultivos en biorreactor debido a que mejoró los parámetros cinéticos (¿= 0.092±0.004 h-1 y td= 7.50±0.326 h) de la cepa transformante en comparación con los obtenidos usando IPTG (¿= 0.057±0.002 h-1 y td= 12.16±0.498 h). Las estrategias de cultivo elegidas fueron cultivo por lote, empleado anteriormente para producir a PodC y el cultivo por auto-inducción, propuesto como una de las estrategias idóneas para la producción de proteínas recombinantes en cepas derivadas de E. coli BL21. Sin embargo, contrario a lo esperado el cultivo por lote tuvo un mejor desempeño que el cultivo por autoinducción. Lo cual pudo ser causado por el fenómeno de represión catabólica de carbono y a la inhabilidad del medio de cultivo auto-inductor para alcanzar altas densidades celulares. El empleo del cultivo por lote permitió alcanzar un rendimiento final del proceso de 84.84±0.84 mg/mL con una actividad específica de 911.63±8.009 U/mg. El cual fue dos veces mayor al reportado anteriormente (36 mg/mL con actividad específica de 1004 U/mg), si bien, el rendimiento final de PodC empleando cultivo por lote fue de solo del 0.30%, por lo que es necesario mejorar los procesos de solubilización y purificación de la proteína. |
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