Detección de rupturas de doble cadena en el ADN por medio de la histona H2AX fosforilada en linfocitos de ratas desnutridas

La desnutrición calórico proteica (DCP) es un estado patológico caracterizado por la falta de aporte adecuado de nutrimentos acordes con las necesidades biológicas del organismo. Existen referencias alrededor de la relación desnutrición y daño al ADN. Son diversos los elementos capaces de inducir da...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: ANA MARIA GONZALEZ GUTIERREZ
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2015
País:México
Institución:Universidad Autónoma Metropolitana
Repositorio:Repositorio Institucional de la UAM Iztapalapa
Idioma:español
OAI Identifier:oai:bindani.izt.uam.mx:t148fh66v
Acceso en línea:https://doi.org/10.24275/uami.t148fh66v
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/LEM/DNA damage
info:eu-repo/classification/LEM/Daños del ADN
info:eu-repo/classification/LEM/Desnutrición
info:eu-repo/classification/LEM/Malnutrition
info:eu-repo/classification/cti/3
Descripción
Sumario:La desnutrición calórico proteica (DCP) es un estado patológico caracterizado por la falta de aporte adecuado de nutrimentos acordes con las necesidades biológicas del organismo. Existen referencias alrededor de la relación desnutrición y daño al ADN. Son diversos los elementos capaces de inducir daño al material genético: estilo de vida, medicamentos, polimorfismos genéticos y medio ambiente se encuentran entre los principales. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de la desnutrición calórico proteica sobre el daño al ADN en linfocitos de ratas lactantes. La desnutrición se indujo por el método de competencia de alimento durante la lactancia, aumentando el número de crías por madre. Se provocó daño al ADN, tratando las células con peróxido de hidrógeno (H2O2) 100 μM durante 1 h. Por lote, se obtuvieron muestras en presencia y ausencia del agente, teniendo finalmente 6 grupos. Para el reconocimiento de linfocitos T se utilizó anti-CD3 FITC. Para revelar la presencia de rupturas de doble cadena en el ADN de linfocitos, mediante la detección de la histona γ-H2AX se ocupó anti-H2AX fosforilada FITC; se identificó por citometría de flujo y microscopía confocal. Para confirmar que existe daño en el material genético, empleamos la cuantificación de p53, utilizando anticuerpo anti-p53 (pS37) y un segundo anticuerpo conjugado con PerCP/Cy5.5; esta proteína fue identificada por citometría de flujo. Para complementar los resultados obtenidos, se empleó la metodología de electroforesis unicelular en condiciones alcalinas (ensayo cometa). Con esta técnica, al someter el material genético a un campo eléctrico, se pueden detectar rompimientos de cadena doble o de cadena sencilla. La imagen que se obtiene es semejante a la de un cometa en el que la cabeza es el nucleoide y el ADN fragmentado es la estela, cuya longitud refleja la cantidad de daño. El porcentaje de linfocitos que expresaron γ-H2AX fue significativamente mayor en los grupos de ratas desnutridas de 2º y 3er grado en presencia y ausencia de H2O2. El aumento en el grupo DN2o fue de 4 veces y de 2.9 veces para DN2oH2O2; para el grupo DN3er fue de 7.94 veces y el grupo de 3er grado en presencia de peróxido tuvo un incremento de 16.1 veces en comparación con el lote testigo. En el caso de p53 (que responde a daños celulares), los datos muestran un incremento significativo de 1.25 veces en el grupo DN2o y de 1.5 en BNH2O2 y un decremento significativo en los grupos de ratas desnutridas de 3er grado en presencia (2.9 veces) y ausencia de H2O2 (1.5 veces) con respecto a los animales BN. El análisis por microscopía confocal indicó un incremento significativo en la intensidad de fluorescencia solo en el grupo DN3erH2O2 comparado con el grupo BN de 27.3 veces. El ensayo cometa mostró un aumento considerable del número de nucleoides con migración clasificada como alta en los grupos de ratas con desnutrición de 2º y 3er grado en presencia y ausencia de H2O2, siendo mayor en los grupos con desnutrición grave Las lesiones observadas en el material genético, pueden deberse a la insuficiencia de varios nutrimentos necesarios para la síntesis de proteínas relacionadas con la integridad del ADN o esenciales para los mecanismos de reparación del mismo y/o a la falta de disponibilidad de las moléculas necesarias para proteger a las células. Los resultados obtenidos sugieren que la desnutrición provoca rupturas de doble cadena en el ADN e induce una disminución considerable en la capacidad celular para repararlas, estas pueden ser detectadas con alta sensibilidad evaluando la expresión de la histona γ-H2AX.

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