Desarrollo de un método molecular para la caracterización funcional rápida de promotores de geminivirus
"Los geminivirus son un grupo muy diversificado de fitopatógenos que, además de ser excelentes modelos para estudiar la replicación del DNA en plantas, han sido utilizados como fuente de secuencias reguladoras para la ingeniería genética de plantas, y como vectores de expresión para la producci...
| Autor: | |
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| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2005 |
| País: | México |
| Institución: | Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica |
| Repositorio: | Repositorio Institucional del IPICYT |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/998 |
| Acceso en línea: | http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/998 |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/Autor/PCR info:eu-repo/classification/Autor/Germinivirus info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/24 info:eu-repo/classification/cti/2415 |
| Sumario: | "Los geminivirus son un grupo muy diversificado de fitopatógenos que, además de ser excelentes modelos para estudiar la replicación del DNA en plantas, han sido utilizados como fuente de secuencias reguladoras para la ingeniería genética de plantas, y como vectores de expresión para la producción de vacunas en células vegetales. El reciente hallazgo de un promotor geminiviral que es 5 veces más potente que el DNA regulador más ampliamente utilizado en la biotecnología de plantas, el promotor 35S del virus del mosaico de la coliflor (CaMV, un caulimovirus), ha estimulado el interés por conocer las propiedades funcionales de otros promotores de geminivirus con miras a su eventual uso tecnológico. En el presente trabajo hemos desarrollado una sencilla pero poderosa metodología basada en la técnica de la PCR, que permite amplificar de manera específica a la Región Intergénica (RI) de prácticamente cualquier geminivirus de dicotiledóneas conocido. Esta región viral contiene dos promotores divergentes con propiedades funcionales muy diferentes, pRep y pCP en el genoma A, y pBC1- pBV1 en el genoma B. El método desarrollado involucra el uso de tres pares de iniciadores universales: uno que hace posible la amplificación de la RI del genoma A de los begomovirus del Nuevo Mundo, de cerca de 400 pb; otro que amplifica la región análoga de los begomovirus del Viejo Mundo (Asia, Europa, Africa y Australia), tanto monopartitas como bipartitas; y un tercer par que amplifica la RI del componente genómico B de los begomovirus del continente americano, generando un producto de PCR de cerca de 900 pb. Los iniciadores están diseñados con un sitio de restricción común, el cual permite la clonación del producto de PCR en un vector que contiene un gen reportero sin promotor (pBS-X-Gus), especialmente construido para hacer factible, en un solo paso de clonación molecular, la generación de dos cartuchos de expresión alternativos, Rep-GUS y CP-GUS en el caso del genoma A, o BC1-GUS y BV1-GUS en el caso del genoma B. Mediante este nuevo procedimiento logramos generar 22 vectores de expresión, 16 de los cuales se derivaron de los genomas A de 8 begomovirus de América (algunos de ellos recientemente descubiertos), otros 2 del genoma A de un begomovirus bipartita de Africa, 2 más del genoma de un begomovirus monopartita originario del Medio Oriente, y finalmente, 2 del genoma B de un begomovirus de América." |
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