CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA Y BIOFÍSICA DE NUCLEÓSIDO DIFOSFATO CINASA DE CAMARÓN BLANCO (Litopenaeus vannamei
"La nucleósido difosfato cinasa (NDK, E.C.2.7.4.6) es una enzima que fosforila nucleósidos-difosfatos para generar nucleósidos-trifosfatos (NTPs), dicha función es de gran importancia para la replicación de ácidos nucleicos como el ácido desoxirribonucléico (ADN). La del camarón blanco (Litopen...
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| Tipo de documento: | tese |
| Estado: | Versão publicada |
| Data de publicação: | 2012 |
| País: | México |
| Recursos: | Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo |
| Repositório: | Repositorio Institucional del CIAD |
| Idioma: | espanhol |
| OAI Identifier: | oai:ciad.repositorioinstitucional.mx:1006/409 |
| Acesso em linha: | http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/409 |
| Access Level: | Acceso aberto |
| Palavra-chave: | info:eu-repo/classification/Microbiología. Palabras clave: Deoxinucleótidos, fosforilación, replicación viral, WSSV, Litopenaeus vannamei, cinasas./Tecnología de alimentos info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/23 info:eu-repo/classification/cti/2302 info:eu-repo/classification/cti/230221 |
| Resumo: | "La nucleósido difosfato cinasa (NDK, E.C.2.7.4.6) es una enzima que fosforila nucleósidos-difosfatos para generar nucleósidos-trifosfatos (NTPs), dicha función es de gran importancia para la replicación de ácidos nucleicos como el ácido desoxirribonucléico (ADN). La del camarón blanco (Litopenaeus vannamei) se expresa durante la infección con el virus de la mancha blanca (WSSV), donde los NTPs generados por NDK pudieran ser utilizados para la replicación viral. En base a lo anterior, es conveniente investigar sobre las rutas metabólicas que producen los NTPs necesarios para la replicación viral, además de estudiar las características bioquímicas y biofísicas de la proteína NDK del camarón L. vannamei con la finalidad de bloquear la replicación del WSSV. En este estudio se sobreexpresó la enzima NDK de forma recombinante y se determinó su actividad enzimática con los deoxi-nucleótidos dGDP, dADP, dTDP y dCDP. La mayor actividad se presentó con dTDP (19,344 U/mg de proteína) y la menor actividad con dGDP (5,505 U/mg de proteína). La afinidad de la enzima por los deoxi-nucleósidos difosfatos se determinó mediante calorimetría de titulación isotérmica (ITC) y se obtuvieron resultados en el rango micromolar (Kd ≈ 10-6) a excepción de dCDP, ya que este sustrato no mostró interacción detectable con la NDK mediante esta técnica. La estructura cuaternaria obtenida mediante cromatografía de exclusión molecular muestra que la NDK de L. vannamei es un trímero. Se obtuvieron cristales de la enzima por el método microbatch en complejo binario con dGDP, lo cual permitirá obtener la estructura tridimensional en estudios posteriores. Los datos obtenidos en este trabajo son de gran importancia ya que la enzima pudiera utilizar análogos nucleosídicos con la finalidad de bloquear la replicación WSSV y el conocimiento de la estructura de la proteína NDK permitirá investigar a largo plazo la interacción de fármacos trifosfosforilados como terminadores de cadena de la replicación." |
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