Evaluación de la preferencia de la HSL BaEstB sobre el 2-naftil acetato vs p-nitrofenil acetato mediante parámetros cinéticos
La prospección y caracterización de enzimas generan información relevante para obtener alternativas que otorguen mayor eficiencia catalítica para la producción de compuestos orgánicos interesantes. Las enzimas lipolíticas bacterianas (lipasas y esterasas) presentan actividades de síntesis y/o hidról...
| Autor: | |
|---|---|
| Tipo de recurso: | tesis de maestría |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2022 |
| País: | México |
| Institución: | Universidad Autónoma del Estado de Morelos |
| Repositorio: | Repositorio Institucional de Acceso Abierto de la Universidad Autónoma del Estado de Morelos |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | oai:http://riaa.uaem.mx:20.500.12055/2657 |
| Acceso en línea: | http://riaa.uaem.mx/handle/20.500.12055/2657 |
| Access Level: | acceso embargado |
| Palabra clave: | info:eu-repo/classification/cti/6 info:eu-repo/classification/cti/31 |
| Sumario: | La prospección y caracterización de enzimas generan información relevante para obtener alternativas que otorguen mayor eficiencia catalítica para la producción de compuestos orgánicos interesantes. Las enzimas lipolíticas bacterianas (lipasas y esterasas) presentan actividades de síntesis y/o hidrólisis de una amplia variedad de sustratos esterificados. En el laboratorio de Biología Molecular de Hongos se realizó la caracterización bioquímica de una esterasa HSL que fue aislada a partir de una librería de cDNA del hongo Basidiomiceto Bjerkandera adusta crecido en petróleo crudo, la cual fue denominada BaEstB. Se demostró que tiene una preferencia por cadenas acilo 2C, sin embargo, su actividad se reduce hasta 18 veces frente al p-NPA, e incluso muestra regioselectividad inclinada por el 2-NA que para 1-NA. Entonces se propuso que la especificidad pudiera verse influenciada por la parte alcohol del sustrato. Posteriormente, se demostró a través de estudios in silico y de HPLC que esta enzima es capaz de hidrolizar el ergoesteroil-acetato. Además, a partir de un análisis de “docking” se determinó que las líneas mutantes (Y81S y L211W) son capaces de utilizar sustratos de cadena acilo mayor a 2C, como ha sido demostrado por la enzima ortóloga RmEstB del hongo mucoral Rhizomucor miehei. En este proyecto se logró la inducción de la BaEstB wt y de las líneas mutantes a las 72 h. Dada la notable preferencia de la BaEstB wt por el 2- NA, se utilizó para determinar el valor de Km que fue de 20 uM y una velocidad de 1x10-6 umol/min. Es importante comparar la actividad de la BaEstB wt y sus líneas mutantes a determinada concentración del ergosteroil acetato, 1-NA, 2-NA y p-NPA y poder dilucidar la preferencia entre estos sustratos, e incluso establecer una correlación con los residuos de aminoácidos que se encuentran en el túnel de entrada al sitio activo. Esto permitiría una caracterización completa, evaluando tanto sustratos comerciales como naturales, y podría darnos indicios de si el ergosterol acetilado es su sustrato celular. Este estudio pone en perspectiva la necesidad de evaluar la especificidad de este tipo de enzimas en sustratos no convencionales como los esteroles esterificados y los alcoholes terciarios. Por lo que hipotetizamos que la HSL BaEstB será una enzima que podría ser utilizada para la obtención de compuestos orgánicos interesantes. |
|---|